GPR55表达与人喉鳞状细胞癌侵袭转移能力的关系

发布时间：2017-09-06 13:29

  本文关键词：GPR55表达与人喉鳞状细胞癌侵袭转移能力的关系

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【摘要】：目的:从mRNA和蛋白水平检测孤儿GPR55(orphan receptor GPR55)在人喉鳞癌组织及癌旁组织的表达情况,并分析GPR55与不同患者临床病理参数之间的关系。通过siRNA干扰GPR55的表达,检测GPR55沉默后对人喉鳞癌Hep-2细胞侵袭和转移能力的影响。方法:1、采用RT-PCR、Western Blot和免疫组化方法检测GPR55在人喉鳞癌组织及癌旁组织的表达情况,并分析GPR55蛋白表达水平与不同患者临床病理参数之间的关系。2、设计并合成特异性siRNA,采用脂质体法瞬时转染人喉鳞癌Hep-2细胞。通过RT-PCR方法检测不同分组中GPR55 m RNA的水平,筛选出沉默效果最佳的片段。采用Transwell侵袭实验和划痕实验检测GPR55沉默后Hep-2细胞的侵袭和转移能力的变化。结果:1、GPR55在人喉鳞癌组织中以中等阳性或强阳性表达为主,而癌旁组织中则以阴性或弱阳性表达为主,并且GPR55的表达与喉鳞癌的分化程度和颈淋巴结转移率有关,差异有统计学意义。GPR55与患者性别、年龄、临床分型、PS评分无关。2、Transwell侵袭实验显示siRNA沉默GPR55后,Hep-2细胞平均穿膜数量比对照组明显减少,P0.05;划痕实验显示对照组12h和24h的Hep-2细胞迁移率明显较siRNA-GPR55-3转染组高,P0.01。结论:1、GPR55在喉鳞癌组织中高表达,并且与分化程度和颈淋巴结转移率有关。2、siRNA沉默GPR55后明显抑制Hep-2细胞的侵袭和转移能力。
【关键词】：GPR55 喉鳞癌 侵袭 转移
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料和方法13-30
• 2.1 材料13-18
• 2.1.1 标本来源13
• 2.1.2 细胞来源13
• 2.1.3 主要器械与仪器13-14
• 2.1.4 主要试剂及耗材14-15
• 2.1.5 主要试剂配制15-18
• 2.2 方法18-29
• 2.2.1 RT-PCR检测人喉鳞癌组织及癌旁组织中GPR55 mRNA的表达情况18-20
• 2.2.2 western blot检测喉鳞癌组织及癌旁组织中GPR55蛋白的表达情况20-22
• 2.2.3 免疫组织化学检测喉鳞癌组织及癌旁组织中GPR55的表达情况22-23
• 2.2.4 细胞培养23-26
• 2.2.5 siRNA-GPR55的设计及细胞转染26-27
• 2.2.6 RT-PCR检测Hep-2 细胞转染后GPR55 m RNA的表达，，筛选最佳沉默序列27-28
• 2.2.7 Transwell侵袭实验检测siRNA沉默GPR55对Hep-2 细胞侵袭能力的影响28-29
• 2.2.8 划痕实验检测siRNA沉默GPR55对Hep-2 细胞迁移能力的影响29
• 2.3 统计学分析29-30
• 第3章 结果30-38
• 3.1 RT-PCR检测喉鳞癌组织及癌旁组织中GPR55 m RNA的表达30-31
• 3.1.1 喉鳞癌组织及癌旁组织总RNA完整性的鉴定30
• 3.1.2 RT-PCR检测结果30-31
• 3.2 western blot检测喉鳞癌组织及癌旁组织中GPR55蛋白的表达31-32
• 3.3 免疫组化检测喉鳞状细胞癌组织及癌旁组织中GPR55的表达32-33
• 3.4 siRNA转染Hep-2 细胞后检测转染效率33-34
• 3.5 siRNA干扰GPR55对Hep-2 细胞GPR55 mRNA表达的影响34-35
• 3.6 siRNA沉默GPR55基因对Hep-2 细胞侵袭能力的影响35-36
• 3.7 siRNA沉默GPR55基因对Hep-2 细胞迁移能力的影响36-38
• 第4章 讨论38-42
• 第5章 结论和展望42-43
• 5.1 结论42
• 5.2 展望42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-47
• 攻读学位期间的研究成果47-48
• 综述48-59
• 参考文献56-59

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本文编号：803397