玻璃体注射腺相关病毒2和慢病毒转染大鼠视网膜的比较

发布时间：2017-09-07 02:15

  本文关键词：玻璃体注射腺相关病毒2和慢病毒转染大鼠视网膜的比较

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【摘要】：目的通过玻璃体注射重组腺相关病毒2载体(r AAV2)和慢病毒载体(LV),比较两者转染成年大鼠视网膜的异同。方法实验组大鼠60只,每组12只玻璃体内分别注射重组腺相关病毒2载体-增强绿色荧光蛋白(r AAV2-EGFP)、重组腺相关病毒2载体-神经突起素-增强绿色荧光蛋白(r AAV2-neuritin-EGFP)、慢病毒载体-红色荧光蛋白(LV-RFP)和慢病毒载体-神经突起素-红色荧光蛋白(LV-neuritin-RFP),对照组注射等量的生理盐水,4周后取材,采用免疫荧光和CTB-FITC检测2种病毒载体在视网膜中转染的细胞及转染率,然后分别采用Real-time PCR和Western blotting检测神经突起素(neuritin)在视网膜中的表达变化。结果 r AAV2能够转染约70%视网膜节细胞(RGCs),LV主要转染色素上皮细胞,RGCs转染率仅为30%;r AAV2-neuritin-EGFP组神经突起素mRNA表达约是r AAV2-EGFP组和对照组的16倍,蛋白表达约为3倍;LV-neuritin-RFP组神经突起素mRNA表达约是LVRFP组和对照组的5.5倍,蛋白表达约为1.7倍。结论 r AAV2玻璃体注射后,转染大部分RGCs且神经突起素表达量高于LV,LV主要转染色素上皮细胞,提示基因治疗眼科疾病和损伤时,涉及到转染RGCs时应采用r AAV2载体,转染色素上皮时宜采用LV载体。
【作者单位】： 第二军医大学基础部解剖学教研室;
【关键词】： 眼 腺相关病毒 慢病毒 视网膜 免疫印迹法 大鼠
【基金】：国家自然科学基金(31271282,31571239)
【分类号】：R77
【正文快照】： Acland[1]等通过重组腺相关病毒将视网膜色素上皮特异性蛋白65(RPE65)注射到患有Leber先天性黑蒙病狗的视网膜下腔,使其恢复视觉功能。美国和英国的3个研究小组率先开展了Leber先天性黑蒙患者基因治疗的临床实验,部分患者的视功能得到恢复[2]。显然,基因治疗作为一种新型分子

【参考文献】

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【共引文献】

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1 唐娟;冯丽娜;李晓军;于娜;王宏;黄瑾;;原核表达的Neuritin蛋白对PC12细胞突起生长的影响[J];中风与神经疾病杂志;2016年04期

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3 张树军;赵臣;黄凤兰;仙玲玲;于娜;杨磊;黄瑾;;Neuritin蛋白的纯化及其对PC12细胞和鸡胚DRG神经元生长的影响[J];神经解剖学杂志;2014年02期

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【二级参考文献】

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【相似文献】

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1 张W，

本文编号：806816