atRA和RARβ对Dectin-1介导的角膜上皮细胞抗真菌固有免疫的影响

发布时间：2017-09-17 06:33

  本文关键词：atRA和RARβ对Dectin-1介导的角膜上皮细胞抗真菌固有免疫的影响

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【摘要】：目的：研究全反式维甲酸(atRA)及其受体RAR β对Dectin-1介导的角膜上皮细胞抗真菌固有免疫的影响,探讨atRA抑制抗真菌固有免疫的机制。方法：烟曲霉菌菌丝刺激体外培养的永生化人角膜上皮细胞(HCECs) 4、8、12、16、32h之后应用RT-qPCR及western blot技术检测RAR β mRNA及蛋白的表达水平。烟曲霉菌刺激不同浓度外源性atRA预处理的HCECs, RT-qPCR, Western Blot及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中Dectin-1,TNF-α和IL-6 mRNA及蛋白的表达。烟曲霉菌刺激未处理或RAR β抑制剂LE135 (10μg/ml)联合atRA预处理的HCECs,以及RAR β激动剂CD2314 (1μg/ml)预处理细胞,刺激8h或16h后收取细胞,用RT-qPCR及Western Blot技术检测Dectin-1 mRNA及蛋白的表达量。结果：真菌刺激HCECs后,RAR β mRNA和蛋白表达量较正常对照组均明显升高,其中mRNA表达量在8h时到达最高,蛋白在16h表达量最多。与真菌刺激组比较,浓度为10-8M、10-7M、10-6M的atRA分别预处理HCECs 12h后给予相同浓度菌丝刺激,Dectin-1 mRNA和蛋白水平均有明显的下降(P0.001),而且浓度为10-6M的atRA抑制作用最明显(P0.001)。与菌丝刺激组比较,10-6 M atRA预处理HCECs组中IL-6, TNF-αmRNA及蛋白表达水平较烟曲霉菌刺激组显著下降(P0.01)。与atRA和菌丝刺激组比较,LE135预处理HCECs组,Dectin-1 mRNA和蛋白表达水平较atRA抑制组升高(P0.01)。与菌丝刺激组比较,CD2314预处理HCECs组,Dectin-1 mRNA和蛋白表达量较菌丝刺激组下降(P0.001)。结论：RAR β在烟曲霉菌刺激后的人角膜上皮细胞中表达增加。atRA可抑制Dectin-1和促炎性细胞因子的表达,RAR β介导atRA对Dectin-1的免疫调节的作用。
【关键词】：atRA Dectin-1 RARβ 角膜上皮细胞 抗真菌免疫
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R772.2
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 材料与方法8-18
• 1.1 实验材料8-10
• 1.1.1 实验细胞和菌种8
• 1.1.2 实验主要试剂及耗材8-10
• 1.1.3 实验所需仪器10
• 1.2 实验方法10-16
• 1.2.1 人永生化角膜上皮细胞的体外培养10-11
• 1.2.2 烟曲霉菌培养及菌丝抗原刺激液的制备11
• 1.2.3 HCECs的预处理及菌丝刺激11-12
• 1.2.4 RT-qPCR实验12-14
• 1.2.5 Western blot实验14-16
• 1.2.6 ELISA实验16
• 1.3 统计学处理16-18
• 第二章 结果18-22
• 2.1 体外培养人角膜上皮细胞（HCECs）的形态学观察18
• 2.2 RAR β在烟曲霉菌感染的角膜上皮细胞的表达18
• 2.2.1 RAR β mRNA表达的变化18
• 2.2.2 RAR β蛋白浓度的变化18
• 2.3 atRA抑制人角膜上皮细胞Dectin-1表达的上调18-19
• 2.3.1 atRA抑制烟曲霉菌菌丝引起的Dectin-1mRNA表达的上调18-19
• 2.3.2 atRA抑制烟曲霉菌菌丝引起的Dectin-1蛋白表达的上调19
• 2.4 atRA通过RAR β调节真菌感染的角膜上皮细胞Dectin-1的表达19-20
• 2.4.1 RAR β和atRA共刺激真菌感染的角膜上皮细胞Dectin-1 mRNA的表达19-20
• 2.4.2 RAR β和atRA共刺激真菌感染的角膜上皮细胞Dectin-1蛋白的表达20
• 2.5 atRA抑制人角膜上皮细胞TNF-α、IL-6表达的上调20-22
• 2.5.1 atRA抑制烟曲霉菌菌丝引起的TNF-α、IL-6mRNA表达的上调20
• 2.5.2 atRA抑制烟曲霉菌菌丝引起的TNF-α、IL-6蛋白的表达20-22
• 第三章 讨论22-25
• 结论25-26
• 参考文献26-28
• 综述28-36
• 参考文献34-36
• 攻读学位期间的研究成果36-37
• 附录37-43
• 致谢43-44

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