脂肪干细胞对兔耳增生性瘢痕的抑制作用研究

发布时间：2017-09-19 15:05

  本文关键词：脂肪干细胞对兔耳增生性瘢痕的抑制作用研究

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【摘要】：目的研究瘢痕内注射脂肪来源干细胞(ADSCs)对兔耳增生性瘢痕的抑制作用及可能机制。方法选取12只新西兰大白兔制作兔耳增生性瘢痕模型并随机平均分成3组,2周后每组右耳瘢痕内注射DMEM作为自身对照,左耳分别注射ADSCs、脂肪来源干细胞条件培养基(ADSCs-CM)及未处理。注射前及注射后1、2、3周检测瘢痕增生情况并于注射后3周取材进行组织化学及基因学检测。结果造模2周后伤口均完全上皮化。DMEM注射及未处理的伤口均逐渐出现增厚、变红、变硬等增生表现并于注射后3周最明显,ADSCs及ADSCs-CM注射伤口均未出现明显增生反应。取材后HE、Masson染色示ADSCs及ADSCs-CM注射瘢痕的胶原密度适中、排列整齐而对照及未处理瘢痕则可见大量致密、杂乱的胶原组织。基因检测发现ADSCs及ADSCs-CM注射瘢痕的α-SMA、CollagenΙ表达显著低于DMEM注射及未处理瘢痕。ADSCs注射瘢痕冰冻切片Dil荧光染色可见大量存活脂肪来源干细胞。结论瘢痕内注射脂肪来源干细胞可以降低α-SMA、CollagenΙ基因表达从而改善瘢痕内胶原堆积并最终显著改善瘢痕增生情况。
【关键词】：脂肪来源干细胞 增生性瘢痕 瘢痕内注射
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R622;R764.9
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第一章 绪论10-14
• 1.1 研究背景与研究意义10-12
• 1.1.1 瘢痕治疗现状10
• 1.1.2 自体脂肪颗粒移植修复瘢痕进展10-11
• 1.1.3 增生性瘢痕发病机制11
• 1.1.4 脂肪干细胞的抗纤维化作用11-12
• 1.2 本实验的研究目的及研究内容12-14
• 1.2.1 本实验的研究内容12-13
• 1.2.2 本实验的研究目的13
• 1.2.3 本研究的创新性13-14
• 第二章 兔耳增生性瘢痕模型的建立14-20
• 2.1 实验背景14-15
• 2.1.1 起源14
• 2.1.2 可用性14-15
• 2.1.3 优越性15
• 2.2 实验材料及方法15-17
• 2.2.1 实验材料及试剂15
• 2.2.2 兔耳瘢痕模型建立15-16
• 2.2.3 注意事项16-17
• 2.3 实验结果及分析17-18
• 2.3.1 实验结果17
• 2.3.2 结果分析17-18
• 2.4 本章小结18-20
• 2.4.1 兔耳瘢痕模型是一种较好的模拟人类皮肤病理性瘢痕的动物模型18-19
• 2.4.2 本实验中成功的建立了稳定的兔耳增生性瘢痕模型19-20
• 第三章 兔脂肪干细胞及条件培养基准备20-39
• 3.1 引言20-21
• 3.2 实验材料与方法21-27
• 3.2.1 实验材料及试剂21-22
• 3.2.2 主要试剂配制方法22-23
• 3.2.3 rADSCs的分离培养及条件培养基制备23-24
• 3.2.4 rADSCs生长曲线24
• 3.2.5 rADSCs的冻存和复苏24-25
• 3.2.6 rADSCs表面分化簇抗原表达的流式细胞仪检测25
• 3.2.7 鉴定rADSCs三向分化潜能25-27
• 3.3 实验结果与分析27-33
• 3.3.1 rADSCs的形态及增殖情况27-28
• 3.3.2 rADSCs的生长曲线28-30
• 3.3.3 rADSCs表面分化簇抗原表达30
• 3.3.4 分化潜能30-33
• 3.4 本章小结33-39
• 3.4.1 ADSCs用于干细胞治疗具有诸多优势33-35
• 3.4.2 本实验可以成功分离、培养出符合标准的ADSCs35-37
• 3.4.3 结论37-39
• 第四章 瘢痕内注射脂肪干细胞对兔耳增生性瘢痕的抑制作用39-54
• 4.1 引言39
• 4.2 材料与方法39-45
• 4.2.1 实验材料及试剂39-40
• 4.2.2 实验分组及瘢痕内注射40
• 4.2.3 瘢痕大体检测40
• 4.2.4 HE及Masson检测40-42
• 4.2.5 存活ADSCs荧光染色示踪42
• 4.2.6 RNA抽提及实时荧光定量PCR42-45
• 4.2.7 统计分析45
• 4.3 实验结果与分析45-52
• 4.3.1 ADSCs及ADSCs-CM注射均可抑制瘢痕增生45-49
• 4.3.2 ADSCs及ADSCs-CM抑制基因表达49-50
• 4.3.3 DMEM注射对瘢痕增生无明显影响50
• 4.3.4 ADSCs对瘢痕抑制作用较ADSCs-CM显著50-51
• 4.3.5 ADSCs注射组可见大量存活ADSCs51-52
• 4.4 本章小结52-54
• 第五章 全文小结及展望54-59
• 主要参考文献59-64
• 中英文对照表64-65
• 致谢65-66
• 学术论文和科研成果66

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