Cyclophilin D在氧化应激下人视网膜色素上皮细胞中的表达

发布时间：2017-09-26 19:44

  本文关键词：Cyclophilin D在氧化应激下人视网膜色素上皮细胞中的表达

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【摘要】：目的检测氧化应激下人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞内Cyclophilin D的表达,初步探索RPE细胞氧化损伤保护新靶点。方法培养细胞系ARPE19及人原代RPE细胞,相差显微镜下观察细胞形态,应用激光共聚焦显微镜免疫荧光法鉴定细胞。不同浓度H_2O_2(0μmol·L~(-1)、100μmol·L~(-1)、500μmol·L~(-1)、1 mmol·L~(-1))处理细胞24 h后,应用RT-PCR检测Cyclophilin D在细胞内的表达。随后预先在部分细胞中加入3μmol·L~(-1)环孢素A(cyclosporin A,Cs A)处理30 min后再加入不同浓度H_2O_2(80μmol·L~(-1)、160μmol·L~(-1)、320μmo·L~(-1))2 h,即Cs A+H_2O_2组,应用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)法检测细胞致死率,并与H_2O_2组的LDH释放量相比较。结果培养的ARPE19和人原代RPE细胞均表达RPE细胞特异性抗体RPE65。100μmol·L~(-1)H_2O_2处理细胞24 h后Cyclophilin D表达量明显升高,当H_2O_2浓度增加到500μmol·L~(-1)时,Cyclophilin D表达量降低,1 mmol·L~(-1)H_2O_2处理时,Cyclophilin D表达水平未见增加。在各H_2O_2组组间,LDH的释放量随着H_2O_2浓度的升高而增加;与H_2O_2组相比,Cs A+H_2O_2组LDH的释放水平明显降低(P0.05)。结论氧化应激下RPE细胞内Cyclophilin D的表达升高,该蛋白表达的增加可能进一步导致氧化应激下细胞的死亡,Cs A可能成为RPE细胞保护的新策略。
【作者单位】： 西安医学院第二附属医院眼科;
【关键词】： 氧化应激 Cyclophilin D 视网膜色素上皮细胞 环孢素A
【基金】：国家自然科学基金资助(编号:81100665) 陕西省科技厅科技新星基金资助(编号:2013KJXX-31)~~
【分类号】：R774.1
【正文快照】： 目前氧化应激被公认为在老年性黄斑变性和糖尿病视网膜病变等脉络膜视网膜病变的发病机制中发挥了重要作用[1-2]。在生理性的视网膜光感受器细胞自我更新过程中,其细胞外节部分被氧化,从而激活视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的吞噬功能,此过程中产生像过

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本文编号：925395