CLDN4在喉鳞状细胞癌中表达的研究

发布时间：2017-10-02 14:23

  本文关键词：CLDN4在喉鳞状细胞癌中表达的研究

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【摘要】：喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一,其中以鳞状细胞癌最为多见。目前研究显示,紧密连接蛋白CLDN4在多种上皮来源肿瘤中表达异常,研究发现,在胰腺癌、乳腺癌及胃癌中CLDN4表达明显上调,而在膀胱癌、肾细胞癌中CLDN4的表达下调,因此推测其表达的改变在多种上皮源性肿瘤的发生发展中起着重要的作用,但其在喉癌中的表达尚未见报道。据报道,DNA甲基化可以调节CLDNs的表达,甲基化的DNA可与Mecp-2结合,导致基因转录的抑制。CLDN4启动子区域的甲基化可导致卵巢癌及膀胱癌中CLDN4基因沉默,但在喉癌中CLDN4的表达是否受到DNA甲基化的调节目前仍不清楚。目的:检测CLDN4在喉癌组织中的表达,并且进一步探讨其表达的调节机制及在喉癌发生发展中的作用。方法:采用免疫组化法检测95例喉鳞状细胞癌和95例癌旁组织中CLDN4及Mcep-2的表达,并进一步分析其与肿瘤分化程度的关系及二者之间的相关性;同时用10μM 5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-dc)作用喉鳞癌细胞系hep-2细胞,通过RT-PCR和western blot法检测5-aza-dc作用6h、12h及24h对CLDN4 mRNA和蛋白表达的影响,并通过划痕实验和transwell实验检测5-aza-dc作用12h对hep-2细胞迁移能力和侵袭能力的影响。结果:喉癌组织中CLDN4表达下调,且其表达与肿瘤的分化程度正相关;喉癌组织中Mecp-2表达上调,其表达与肿瘤的分化程度无明显相关性;喉癌组织中CLDN4的表达与Mecp-2的表达相关;5-aza-dc作用hep-2细胞后可可以上调CLDN4的表达,并使hep-2细胞的迁移和侵袭能力下降。结论:1.CLDN4在喉癌组织中表达下调,并与Mecp-2的表达相关;2.5-aza-dC可以上调hep-2细胞中CLDN4的表达,从而抑制了细胞的迁移及侵袭能力。3.CLDN4表达下调可能与DNA甲基化有关,并可能促进了喉癌的发生发展。
【关键词】：喉鳞状细胞癌 CLDN4 DNA 甲基化
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 摘要4-6
• abstract6-12
• 第一章 前言12-17
• 第二章 实验材料和方法17-26
• 2.1 实验材料17
• 2.2 主要试剂及来源17-18
• 2.3 主要仪器18-19
• 2.4 引物设计合成及一抗19
• 2.5 实验方法19-26
• 2.5.1 免疫组化法分析CLDN4及mecp-2 在组织中的表达19-20
• 2.5.2 细胞培养20-21
• 2.5.3 RT-PCR方法检测hep-2 细胞株中CLDN4的表达21-22
• 2.5.4 Western blot方法检测hep-2 细胞株中CLDN4的表达22-23
• 2.5.5 使用 5-aza-dc对hep-2 细胞株进行去甲基化处理23
• 2.5.6 RT-PCR 方法检测5-aza-dc处理后hep-2细胞株中CLDN4的表达23
• 2.5.7 Western blot 方法检测5-aza-dc处理后hep-2细胞株中CLDN4的表达23
• 2.5.8 细胞划痕实验检测5-aza-dc处理后hep-2细胞株的迁移能力23-24
• 2.5.9 transwell实验检测5-aza-dc处理后hep-2细胞株的侵袭能力24-25
• 2.5.10 统计学分析25-26
• 第三章 实验结果26-34
• 3.1 CLDN4及Mecp-2 在组织中的表达结果26-29
• 1. CLDN4在喉癌组织中的表达26
• 2. CLDN4与肿瘤分化程度的相关性分析26-27
• 3. Mecp-2 在喉癌组织中的表达27-28
• 4. Mecp-2 与肿瘤分化程度相关性分析28-29
• 5. 喉癌组织中CLDN4表达与Mecp-2 表达的相关性分析29
• 3.2 5-aza-dc 对 hep-2 细胞 CLDN4 表达的影响29-31
• 3.2.1 RT-PCR 法检测 5-aza-dc 对 hep-2 细胞 CLDN4 mRNA 表达的影响29-30
• 3.2.2 Western blot 法检测 5-aza-dc 对 hep-2 细胞 CLDN4 蛋白表达的影响30-31
• 3.3 5-aza-dc上调CLDN4对hep-2细胞迁移及侵袭能力的影响31-34
• 3.3.1 5-aza-dc上调CLDN4对hep-2细胞迁移能力的影响31-32
• 3.3.2 5-aza-dc上调CLDN4对hep-2细胞侵袭能力的影响32-34
• 第四章 讨论34-38
• 结论38-39
• 参考文献39-45
• 作者简介及在学期间所发表的论文45-46
• 致谢46

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3 ;喉鳞状细胞癌中蛋白质酪氨酸激酶的活性[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;1994年01期

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本文编号：960082