敲低Sp1对CNE2细胞STGC3表达及恶性表型的影响

发布时间：2017-10-06 14:48

  本文关键词：敲低Sp1对CNE2细胞STGC3表达及恶性表型的影响

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【摘要】：目的:探明Sp1基因在鼻咽癌CNE2细胞中对STGC3基因表达的调控作用,研究敲低Sp1基因表达对CNE2细胞生长增殖、侵袭及迁移的影响。方法1.构建慢病毒GTP-HIS-Sp1干扰载体,将干扰载体转染于CNE2细胞,建立Sp1基因低表达的CNE2细胞系(GTP-HIS-Sp1-CNE2);通过qRT-PCR及Western Blotting方法,从mRNA及蛋白质水平,检测Spl基因的表达状况,确定GTP-HIS-Sp1-CNE2细胞成功建立。2.实验分组为,实验组GTP-HIS-Sp1-CNE2,空载体组GTP-HIS-CNE2及对照组CNE2,采用q RT-PCR及Western Blotting方法,从mRNA及蛋白质水平,检测GTP-HIS-Sp1-CNE2细胞与对照组间STGC3基因的表达差异,分析Sp1对CNE2细胞中STGC3基因表达的调控作用;施用流式细胞仪、MTS、Transwell及细胞克隆形成方法,检测敲低Sp1基因表达后,CNE2细胞生长增殖、侵袭、迁移及非停泊依赖性生长能力的变化。结果1.构建载体经DNA测序鉴定,证实GTP-HIS-Sp1慢病毒载体成功构建;以病毒滴度为5.0×108 TU/mL,将GTP-HIS-Sp1感染CNE2细胞,qRT-PCR及Western Blotting方法,检测结果显示,感染后,CNE2细胞中Sp1的表达降低,Sp1基因被敲低,表明GTP-HIS-Sp1-CNE2细胞成功建立。2.qRT-PCR及Western Blotting检测GTP-HIS-Sp1-CNE2细胞STGC3基因表达,结果显示,敲低Sp1基因表达,在mRNA和蛋白质水平,均显示出STGC3表达被恢复,差异有统计学意义(P0.05),实验证实敲低Sp1基因表达,可上调STGC3的表达,进一步实验证实了Sp1对STGC3基因起负调控作用。3.MTS实验及克隆形成实验,结果均显示,敲低Sp1基因表达,CNE2细胞的生长增殖速度减慢,克隆形成能力降低;Transwell实验结果表明,敲低Sp1基因表达,CNE2细胞迁移及侵袭能力明显降低;流式细胞仪检测结果显示,GTP-HIS-Sp1-CNE2组G1期细胞比例为78.31%,细胞凋亡率约为14.56%,空载体与未转染CNE2组,G1期细胞比例分别为68.26%、67.33%,凋亡率分别约为9.9%和10.42%,实验证实Sp1基因表达下调,导致CNE2细胞阻滞于G1期,细胞凋亡增加;上述研究证实敲低Sp1基因表达,CNE2细胞STGC3表达被恢复,部分恶性表型被逆转。结论:1.敲低Sp1基因在CNE2细胞的表达,STGC3基因表达被恢复,证实Sp1对STGC3基因表达具有负性调控作用。2.敲低Sp1基因的表达,可部分逆转CNE2细胞的恶性表型。
【关键词】：鼻咽癌 STGC3基因 Sp1基因 CNE2 恶性表型
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料与方法12-30
• 2.1 材料12-14
• 2.2 方法14-30
• 第3章 实验结果30-46
• 3.1 GTP-HIS-Sp1慢病毒载体的构建30-32
• 3.2 GTP-HIS-Sp1慢病毒感染CNE2细胞32-33
• 3.3 GTP-HIS-Sp1对Spl mRNA表达的抑制作用33-34
• 3.4 GTP-HIS-Sp1对Spl蛋白质表达的抑制作用34-35
• 3.5 敲低Sp1后对STGC3基因mRNA表达水平的影响35-37
• 3.6 敲低Sp1后对STGC3基因蛋白表达水平的影响37-38
• 3.7 敲低Sp1后对CNE2细胞增殖的影响38-39
• 3.8 流式细胞术分析敲低Sp1后对细胞周期及凋亡的影响39-41
• 3.9 敲低 Sp1 后对 CNE2 细胞迁移及侵袭能力的影响41-44
• 3.10 敲低Sp1后对细胞克隆形成能力的影响44-46
• 第4章 讨论46-52
• 第5章 结论52-54
• 参考文献54-62
• 综述 抗肿瘤药物治疗靶点 Sp1 研究进展62-72
• 参考文献66-72
• 附录72-76
• 攻读学位期间发表的论文76-78
• 致谢78

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1 唐芬;敲低Sp1对CNE2细胞STGC3表达及恶性表型的影响[D];南华大学;2016年

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本文编号：983346