乳酸杆菌在肝脏炎症和肝细胞肝癌中的作用

发布时间：2017-10-19 02:00

  本文关键词：乳酸杆菌在肝脏炎症和肝细胞肝癌中的作用

  更多相关文章： 益生菌 急性肝损伤 T细胞 TNF-α 益生菌 嗜酸乳杆菌 肝细胞肝癌 MDSC

【摘要】：第一章乳酸杆菌Pro15在急性肝损伤中的作用及机制研究目的:实验室早期分离出一株益生菌,我们将其命名为Pro15乳酸杆菌。益生菌在多种疾病中都起到保护作用,因此我们研究了Pro15菌株在小鼠急性肝损伤模型中的作用,并且探究其作用机制。方法:将小鼠分为Pro15菌株实验组、鼠李糖乳杆菌GG株(Lactobacillus rhamnosus GG strain,LGG)菌株对照组和PBS对照组,在第1、3、5、7天以灌胃的方法给小鼠注射Pro15菌株、LGG菌株或PBS,在第8天采用腹腔注射50%四氯化碳溶液构建小鼠急性肝损伤模型。灌胃体积均为100 ul,菌浓度为109/100 ul。我们按5.5 ml/kg给小鼠腹腔注射四氯化碳溶液,观察小鼠的存活情况。我们按2ml/kg给小鼠腹腔注射四氯化碳溶液,24小时后颈椎脱臼处死小鼠,检测小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量,HE染色分析肝脏损伤程度,流式分析小鼠免疫细胞亚群的比例以及胞内染色确定CD8+T、CD4+T和NK细胞表达TNF-α和IFN-γ的情况。结果:与PBS对照组相比,Pro15菌株可以减轻小鼠的急性肝脏炎症:(1)Pro15菌株显著延长急性肝损伤小鼠的存活时间;(2)Pro15菌株可以降低血清中谷草转氨酶(AST)的含量;(3)Pro15菌株显著减轻急性肝损伤小鼠的肝脏损伤。流式结果显示Pro15菌株抑制小鼠体内NK细胞和CD8+T细胞的活化;降低Th1细胞的比例,减少CD8+T细胞分泌干扰素γ(IFN-γ);Pro15菌株促进脾脏和肝脏内淋巴细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF-α);肿瘤坏死因子受体缺失小鼠的急性肝损伤模型实验证明Pro15菌株无法延长TNFR2缺失小鼠的存活。结论:乳酸杆菌Pro15菌株可以减轻四氯化碳诱导的急性肝损伤,其机制可能是通过抑制NK细胞和CD8+T细胞的活化以及促进TNF-α的表达并作用于TNFR2通路,从而对肝脏炎症起保护作用。第二章乳酸杆菌Pro15在肝癌发生发展中的作用目的:Pro15菌株在小鼠急性肝损伤模型中起到保护作用,肝脏炎症与肝癌的发生发展密切相关,因此我们研究了Pro15菌株在小鼠肝癌发生发展中的作用及相关机制。方法:将小鼠分为Pro15实验组、LGG菌株对照组和PBS对照组,在第1、3、5、7天以灌胃的方法给小鼠注射Pro15菌株、鼠李糖乳杆菌株(LGG)或PBS,在第8天给小鼠注射hepa1-6肝癌细胞株建立原位肝癌模型。构建肝癌模型:取对数生长期的hepa1-6细胞株用PBS制成单细胞悬液(4×107/ml),利用手术的方法,用胰岛素注射器吸25μl细胞悬液缓慢的注射入暴露的肝脏中,再将小鼠伤口缝合。2周后处死小鼠,测量并计算小鼠肿瘤体积。流式染色分析荷瘤鼠脾脏和肝脏中免疫细胞表型;胞内染色检测荷瘤鼠脾脏和肝脏中淋巴细胞分泌IFN-γ、TNF-α和IL-17A的水平。结果:构建的原位肝癌模型表明Pro15菌株对肝细胞肝癌的发展具有促进作用。流式染色结果表明Pro15菌株会增加脾脏中髓系来源的抑制性细胞(myeloid derived suppressor cells,MDSC)的比例和细胞总数。结论:Pro15菌株可以促进肝细胞肝癌的发生发展,其机制可能是通过增加MDSC数量来促进肿瘤的生长。
【关键词】：益生菌 急性肝损伤 T细胞 TNF-α 益生菌 嗜酸乳杆菌 肝细胞肝癌 MDSC
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7;R575
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 第一章 乳酸杆菌Pro15在急性肝损伤中的作用及机制研究14-43
• 1 引言14-16
• 2 材料与方法16-29
• 2.1 实验材料16-19
• 2.2 实验方法19-29
• 3 实验结果29-40
• 3.1 Pro15菌株延长急性肝损伤小鼠的生存时间。29
• 3.2 Pro15菌株减轻急性肝损伤小鼠的肝脏损伤。29-31
• 3.3 Pro15菌株抑制CD8+ T细胞激活。31-32
• 3.4 Pro15菌株抑制NK细胞激活。32
• 3.5 体外共培养Pro15菌株抑制T细胞的激活。32-33
• 3.6 Pro15菌株上调肿瘤坏死因子(TNF)α的表达。33-34
• 3.7 CBA检测急性肝损伤小鼠血清中细胞因子水平。34-35
• 3.8 ELISA检测肝脏表达TNF-α水平。35-36
• 3.9 抗小鼠TNF-α恢复Pro15菌株对T细胞激活的抑制。36-37
• 3.10 Realtime PCR检测Toll样受体表达。37
• 3.11 PCR鉴定TNF受体敲基因小鼠。37-38
• 3.12 流式鉴定TNF受体敲基因小鼠。38-39
• 3.13 TNFR2缺失加剧小鼠急性肝损伤相关死亡。39-40
• 4 讨论40-43
• 第二章 乳酸杆菌Pro15在肝癌发生发展中的作用及机制研究43-55
• 1 引言43-44
• 2 材料与方法44-50
• 2.1 实验材料44-47
• 2.2 实验方法47-50
• 3 实验结果50-54
• 3.1 Pro15菌株促进肝细胞肝癌的生长。50-51
• 3.2 Pro15菌株增加MDSC比例。51-52
• 3.3 Pro15菌株促进CD4+ T和CD8+ T细胞激活。52
• 3.4 Pro15菌株不影响CD8+ T和CD4+ T细胞细胞因子表达。52-53
• 3.5 Pro15菌株降低肠道紧密连接蛋白表达。53-54
• 4 讨论54-55
• 参考文献55-62
• 综述 益生菌在宿主健康中的作用62-75
• 参考文献67-75
• 攻读硕士学位期间公开发表的论文75-77
• 附录77-78
• 致谢78-80

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