胃病患者非幽门螺杆菌螺杆菌（NHPH）感染分析

发布时间：2017-10-28 15:22

  本文关键词：胃病患者非幽门螺杆菌螺杆菌（NHPH）感染分析

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【摘要】：幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,简称H. pylori或HP)并不是唯一一种能够定植于人类胃部的螺杆菌。非幽门螺杆菌螺杆菌(gastric non-Helicobacter pylori Helicobacters, NHPH)是由一类通常定植于动物胃部的长螺杆状革兰氏阴性菌组成,其感染同样能够导致人类多种胃部疾病。国外研究报道,0.2-6%的胃病患者能够检测到NHPH的存在,但国内缺乏人群感染率系统调查数据。本研究拟利用特异PCR对中国胃病患者中NHPH的感染情况进行检测分析,并对人源和猪源H. suis进行了多位点序列分型(MLST)分析。第一部分：胃病患者非幽门螺杆菌螺杆菌(NHPH)感染分析利用基于尿素酶基因的特异PCR检测方法对北京地区1517位快速尿素酶试验(RUT)阳性患者的胃黏膜活检组织标本进行了5种NHPH (H. suis, H. bizzozeronii, H.felis, H. salomonis, H. heilmannii sensu strict(s.s.))的检测。HP的分离培养和特异PCR用于检测患者HP感染情况。并对浙江地区202份经real-time PCR和特异PCR检测为HP阴性的胃黏膜标本DNA进行了H. suis的检测分析。结果显示,北京地区HP阳性胃病患者中NHPH感染率为11.87%(178/1499),远高于其他国家和地区。其中H. suis的感染率最高,约为6.94%。其他四种螺杆菌(H. felis, H. bizzozeronii, H. heilmannii s.s和H. salomonis)的感染率分别为2.20%,0.13%,0.07%和2.54%。此外,分析显示有部分胃病患者同时感染了3种螺杆菌。202份HP阴性标本中共检测出8份H. suis阳性标本,阳性率为3.96%,显示HP阴性胃病患者同样存在较高的H. suis感染率。本研究是在国内首次开展对胃病患者中NHPH的感染情况的大样本综合分析,发现胃病患者中NHPH的感染比较普遍,H. suis的感染率明显高于其他螺杆菌。因此,对胃病患者进行病原诊断时应考虑NHPH感染的存在。第二部分：人源和猪源H. suis多位点序列分型(MLST)分析H. suis是一种定植于猪及非人灵长类动物胃部的革兰氏阴性的人兽共患病原菌,其感染已被证实与人类多种胃部疾病有关。与猪等动物的直接接触和肉类消费可能是人感染H. suis的主要传播途径。在中国,猪养殖业及饮食习惯(喜食猪胃等内脏)所关联的H. suis感染备受关注,但缺乏相关研究。本研究对60份新鲜猪胃标本进行了H. suis感染情况检测,利用MLST技术对猪胃中和患者携带的H. suis及国外菌株进行遗传进化关系分析。结果显示,60份猪胃标本中共检测出20份H. suis阳性,阳性率为33.33%。H. suis MLST分析共发现了14个新的ST型。人源(2份阳性标本)和猪源(20阳性标本)H. suis分布在3个克隆群内,亲缘关系相近。国内与国外H. suis可分成3个克隆群,且亲缘关系相近,但不同克隆群内多数国内菌株能单独成簇。第三部分：HP克拉霉素耐药相关基因23S rRNA检测分析随着克拉霉素(CLA)耐药率的不断上升,以CLA为组方成分的HP根除方案的根除率不断下降。HP对CLA耐药的主要机制是由23S rRNA基因的点突变所致,主要包括A2143G和A2142G/C三种突变类型,但三种点突变在我国的覆盖率仍缺乏充分的数据支持。本研究通过PCR-DNA测序相结合方法对1086份胃黏膜活检组织标本进行了23S rRNA突变特征分析。结果显示,北京地区HP 23S rRNA的突变类型以A2143G为主,突变率为66.12%,其次为A2142G (1.48%), A2142C (0.16%)。CLA耐药菌株中A2143G和A2142G/C 3种常规突变类型的总突变率为67.76%,仍有32.24%的耐药菌株未发生相关突变,显示3种常规突变的检测对HPCLA耐药的覆盖率不足。另外,发现C1951T和G1933A两个突变位点仅出现在耐药菌株中,提示可能与HP的CLA耐药相关。第四部分：利用同一份胃黏膜标本进行HP分离培养及CYP2C19基因多态性检测的研究若能采用同一块胃黏膜活检组织标本在完成HP分离培养的同时进行CYP2C19代谢类型分析,将对完善和推广HP个体化根除方案具有重要意义。本研究通过PCR-DNA测序相结合方法在检测胃病患者CYP2C19基因多态性时,探索采用同一块胃黏膜活检组织标本在完成HP分离培养的同时进行CYP2C19代谢类型分析的可行性。结果显示,采用同一块胃黏膜活检组织标本,可获得CYP2C19检测的100%成功率,HP的分离培养率与本实验室用整块胃黏膜标本无明显差异。结果表明用同一份胃黏膜标本可同时满足HP分离培养(和药敏试验)及CYP2C19基因多态性的检测。
【关键词】：NHPH H.suis H.pylori 23S rRNA CYP2C19
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R573
【目录】：

• Abbreviation (缩略词)5-6
• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 第一部分 胃病患者非幽门螺杆菌螺杆菌(NHPH)感染分析13-26
• 前言13-14
• 材料与方法14-19
• 实验结果19-23
• 讨论23-25
• 小结25-26
• 第二部分 人源和猪源H.suis多位点序列分型(MLST)分析26-38
• 前言26-27
• 材料与方法27-31
• 实验结果31-36
• 讨论36-37
• 小结37-38
• 第三部分 幽门螺杆菌克拉霉素耐药相关基因23S rRNA检测分析38-48
• 前言38-39
• 材料与方法39-42
• 实验结果42-45
• 讨论45-47
• 小结47-48
• 第四部分 利用同一份胃黏膜标本进行幽门螺杆菌分离培养及CYP2C19基因多态性检测的研究48-58
• 前言48
• 材料与方法48-52
• 实验结果52-56
• 讨论56-57
• 小结57-58
• 参考文献58-70
• 综述70-84
• 参考文献75-84
• 在读期间发表论文84-85
• 致谢85

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本文编号：1108825