乙肝病毒基因组序列扩增的条件优化和结果分析

发布时间：2017-10-29 09:30

  本文关键词：乙肝病毒基因组序列扩增的条件优化和结果分析

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【摘要】：目的优化乙型肝炎病毒(HBV)不同长度基因片段PCR扩增条件,为后续机制研究提供实验基础。方法运用PCR或巢式PCR(Nested PCR)方法扩增6例临床乙肝患者HBV DNA,针对特异性目的片段,通过优化Mg2+浓度、引物浓度、Taq酶用量、DMSO浓度等,获得特异性扩增条带,PCR产物直接测序并使用CHROMAS、MEGA等生物学软件进行结果分析。结果通过综合分析各种实验条件对PCR扩增结果的影响,最终确认在50μL扩增体系中,2.5 mmol/L Mg2+、200 nmol/L特异性引物、1.5 U Taq酶、56℃退火在本实验室可获得良好的扩增效果,适量二甲基亚砜(DMSO)可减少非特异性干扰,同时建议对短片段可酌量减少Taq酶使用量。生物信息学分析示6例HBV感染标本中1例为B基因型,5例为C基因型,共发现S基因21个核酸变异及9个氨基酸可改变。结论建立了适合本实验室的HBV DNA扩增体系以及后续生物信息学分析方法,明确了不同的扩增体系条件对PCR扩增效果具有重要影响。
【作者单位】： 安徽省血液中心;福建省血液中心;江西省血液中心;解放军第105医院;
【关键词】： 乙型肝炎病毒 PCR 巢式PCR 方法学优化 生物信息学
【分类号】：R512.62;R440
【正文快照】： #共同第1作者;△通信作者:吕蓉(1969.06-),女,副主任技师,研究领域:输血免疫学相关检测,电话:13645602742,Email:lvrong612@126.com乙型肝炎病毒(HBV)是引起病毒性肝炎的主要病原体之一,由其引起的传染病——乙型肝炎感染呈世界性分布,严重危害人类生命健康,成为重要的社会公

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本文编号：1112439