靶向脂质纳泡在肝脏缺血再灌注损伤中的分子显像实验研究

发布时间：2017-10-30 02:38

  本文关键词：靶向脂质纳泡在肝脏缺血再灌注损伤中的分子显像实验研究

  更多相关文章： 超声分子成像 靶向超声造影剂 纳泡 缺血再灌注损伤 细胞间粘附分子-1

【摘要】：目的构建一种新型的纳米级靶向超声造影剂,考察其体外寻靶特性及体内造影增强效果,评估超声分子成像技术在早期诊断肝脏缺血再灌注损伤病变的可行性及可重复性。方法应用薄膜水化和超声振荡法制备普通的脂质纳泡,然后利用亲和素-生物素连接法,将生物素化的ICAM-1抗体靶向连接于生物素化的脂质纳泡上,制备载ICAM-1抗体的靶向脂质纳泡。培养原代分离的人肝窦内皮细胞(HHSEC),建立低温缺氧／复氧(H/R)模型,在激光共聚焦显微镜下观察携带ICAM-1抗体的靶向脂质纳泡体外寻靶与细胞的结合情况。按照Pringle’s法建立兔肝脏缺血再灌注损伤动物模型(I/R组),并设假手术组(SO组)作为对照。建模成功后,行肝脏超声造影检查,应用QLAB软件获取感兴趣区域(ROI)肝脏血流参数：峰值强度(PI)、达峰时间(time to peak)及增强持续时间(time of duration),定量评价靶向脂质纳泡超声造影的显影效果、稳定性及造影参数的可靠性。结果自制靶向脂质纳泡粒径约148.15±3975nm, Zeta电位-28.4±7.9 mV,浓度(3.6～7.4)×109个/ml,激光共聚焦显微镜下观察靶向脂质纳泡的绿色荧光较好地粘附在H/R组人肝窦内皮细胞表面。肝脏IRI后,以细胞凋亡为主。肝窦内皮细胞凋亡比例17.53±1.19%,肝细胞凋亡比例5.61±0.85%。IRI后,肝窦内皮细胞ICAM-1显著表达,且与ALT、LDH呈线性相关,相关系数分别为r=0.812,r=0.854。靶向脂质纳泡体内显影效果稳定,组内相关系数ICC=0.938,可重复性好。超声造影测量参数选取肝包膜下3cm深度作为ROI区域,变异性最小,CV 3.9%。两名观测者在相同条件下测量结果一致性好,ICC=0.948,信度较高。动物体内超声造影显示,I/R组靶向脂质纳泡PI及增强持续时间明显高于普通纳泡,达峰时间明显提前；靶向脂质纳泡的PI及增强持续时间在I/R组明显高于SO组。I/R组靶向脂质纳泡PI与肝脏IRI病理Suzuki's评分呈正相关,秩相关系数rs=0.648;与IRI后肝内ICAM-1表达呈线性相关,相关系数r=0.706。结论自制的靶向脂质纳泡粒径小而均一,性质稳定,与抗体结合率高,体外细胞靶向结合实验寻靶能力良好。与普通脂质纳泡相比,靶向脂质纳泡超声造影具有较好的特异性、高效性及稳定性,重复性好,可以从分子水平,无创、定量评估肝脏缺血再灌注损伤,提高了超声分子成像技术的诊断能力,具有可行性。
【关键词】：超声分子成像 靶向超声造影剂 纳泡 缺血再灌注损伤 细胞间粘附分子-1
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 中英文缩略语对照表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-15
• 第一部分 载ICAM-1抗体靶向脂质纳泡制备及物理性质检测15-23
• 1 材料与方法15-18
• 2 结果18-20
• 3 讨论20-22
• 4 小结22-23
• 第二部分 载ICAM-1抗体靶向脂质纳泡细胞结合实验23-35
• 第一节 肝窦内皮细胞缺氧/再给氧模型建立23-29
• 1 材料与方法23-27
• 2 结果27-29
• 第二节 靶向脂质纳泡细胞寻靶实验研究29-35
• 1 材料与方法29-31
• 2 结果31-32
• 3 讨论32-34
• 4 小结34-35
• 第三部分 载ICAM-1抗体靶向脂质纳泡体内显影效果及重复性研究35-57
• 第一节 载ICAM-1抗体靶向脂质纳泡体内显影重复性研究35-40
• 1 材料与方法35-38
• 2 结果38-40
• 第二节 载ICAM-1抗体靶向脂质纳泡体内显影效果研究40-57
• 1 材料与方法40-43
• 2 结果43-53
• 3 讨论53-56
• 4 小结56-57
• 参考文献57-61
• 文献综述61-83
• 参考文献77-83
• 攻读学位期间发表文章情况83-84
• 致谢84

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本文编号：1115773