连接黏附分子A在促进MSC修复CC14肝损伤中的作用及其机制

发布时间：2017-10-31 04:32

  本文关键词：连接黏附分子A在促进MSC修复CC14肝损伤中的作用及其机制

  更多相关文章： 连接黏附分子A 间充质干细胞 肝损伤 细胞迁移

【摘要】：研究背景肝脏是人体内重要的器官,具有代谢、合成、储存等多种生理功能,并且具有强大的再生功能。由于其独特的功能,肝脏易受药物、毒素、酒精、化学物质等造成的损害,引起功能障碍和再生能力丧失。目前各种急慢性肝脏疾病已是影响人类健康的重要原因之一,特别是终末期肝疾病尚缺乏有效地治疗手段。间充质干细胞是一类来源广泛的成体干细胞,能够分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等,并且具有自我更新的潜能。目前间充质干细胞被广泛应用于肝脏、肺、肾脏等多种组织损伤和移植物抗宿主病等多种疾病的治疗,其作用机制可能包括转分化、免疫调节和免疫抑制、抑制炎症、分泌细胞因子等。间充质干细胞向损伤部位的靶向迁移对其发挥作用非常重要,因此提高细胞移植后损伤部位间充质干细胞的数量是提高治疗效果的重要手段。连接黏附分子A是脊柱动物细胞中高度保守的一类连接分子,其独特的跨膜结构使其能够发生同源二聚化,参与紧密连接的形成,另外还具有调节细胞增殖、迁移、信号传导的功能。前期研究发现,通过上调间充质干细胞的连接粘附分子JAM-A表达,可促进间充质干细胞定向迁移到发育不成熟的毛囊组织,参与毛囊结构的重建,增强裸鼠的毛发再生。基于以上研究,我们通过分离、鉴定、扩增间充质干细胞,利用病毒载体构建连接黏附分子过表达的间充质干细胞,研究JAM-A在促进MSC修复CC14肝损伤中的作用及其机制。第一部分人早胚间充质干细胞的分离、鉴定与培养研究目的：利用间充质干细胞贴壁生长的特性,从早期流产胚胎中分离出间充质干细胞,进行鉴定,并进行传代培养和扩增,为后续进一步研究奠定基础。研究方法：利用贴壁培养方法获取原代间充质干细胞,通过形态学、免疫荧光和流式细胞术检测细胞表面阳性和阴性的细胞标志以及分化潜能,对细胞进行鉴定,并进行传代培养。研究结果：贴壁培养法可获得间充质干细胞,细胞形态呈纺锤形成纤维细胞状,流式细胞术检测细胞均阳性表达CD29(82.89±2.35%)、CD44 (91.95±1.11%)、CD90(92.90±0.97%),造血谱系特异性标志CD34和CD45的阳性率均小于1%,分别为(0.65±0.21%)和(0.77±0.14%),免疫荧光结果显示：MSC阳性表达表达CD29、CD44、 CD105。第二部分连接黏附分子JAM-A过表达系统的构建研究目的：利用病毒载体构建JAM-A过表达的MSC系统研究方法：利用cDNA文库获取目的基因JAM-A,并进行扩增,利用pGC-FU慢病毒载体构建重组质粒。再将重组载体转染至293T细胞进行病毒包装,并检测病毒滴度。选择合适条件进行MSC的病毒感染,并检测JAM-A蛋白的表达。研究结果：重组质粒测序结果正确,病毒滴度2.00E+7 TU/ml,在MOI值为50时可获得理想的感染效率,细胞感染率均在90%以上。重组质粒在感染MSC后稳定表达,WB结果显示JAM-AOV-MSC组JAM-A蛋白表达水平较MSC组显著升高。第三部分JAM-A在促进MSC修复CCl4肝损伤中的作用及其机制研究目的：研究JAM-A在促进MSC修复肝损伤中的作用,并探讨其可能机制。研究方法：制备CCl4诱发小鼠肝损伤,使用CD-DiI标记MSC,通过腹腔注射方式进行间充质干细胞移植,检测小鼠肝脏形态学、血清ALT、AST水平等肝损伤指标,利用免疫组织化学和免疫组织荧光技术检测肝脏JAM-A的表达和分布和肝损伤时炎症细胞浸润,在体外进行细胞粘附实验观察JAM-A对细胞粘附能力的影响,并观察JAM-A对MSC分泌作用的影响。研究结论：CM-Dil可安全稳定的标记MSC;JAM-A过表达可促进MSC对肝损伤的保护作用：降低血清ALT、AST水平、减少细胞坏死、减少炎症细胞浸润；肝损伤后JAM-A在血管内皮的表达增加；JAM-A可增强MSC的粘附能力,促进MSC抑炎因子分泌作用。
【关键词】：连接黏附分子A 间充质干细胞 肝损伤 细胞迁移
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 缩略词表10-12
• 第一部分 人早胚间充质干细胞的分离、鉴定与培养12-26
• 引言12-14
• 材料和方法14-20
• 实验结果20-23
• 讨论23-26
• 第二部分 连接黏附分子JAM-A过表达系统的构建26-54
• 引言26-28
• 材料和方法28-42
• 实验结果42-49
• 讨论49-54
• 第三部分 连接黏附分子JAM-A在MSC修复肝损伤中的作用及机制54-77
• 引言54-56
• 材料和方法56-65
• 实验结果65-74
• 讨论74-77
• 综述77-86
• 参考文献86-99
• 在读期间发表论文和参加科研工作情况99-101
• 致谢101-102

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 本刊编辑部;;我国首家间充质干细胞库在天津落成[J];中国药业;2006年07期

2 张鑫;赵桂秋;;间充质干细胞在眼科领域的研究与应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年06期

3 史春梦;;间充质干细胞表述中需要注意的几个问题[J];第三军医大学学报;2009年14期

4 瞿海龙;边剑飞;张冰;王颖;周英莲;;间充质干细胞临床应用的前景与困惑[J];医学研究与教育;2011年05期

5 郭子宽;;间充质干细胞及其临床应用中的几个问题[J];中国组织工程研究;2012年01期

6 李炳尧;武晓云;吴岩;;间充质干细胞的分离与培养:从实验室到临床[J];中国组织工程研究;2013年14期

7 吴实;邓列华;;皮肤间充质干细胞在促进皮肤愈合中的作用[J];实用皮肤病学杂志;2013年03期

8 吴清法,王立生,吴祖泽;间充质干细胞的来源及临床应用[J];军事医学科学院院刊;2002年03期

9 黄定强;间充质干细胞的研究进展[J];国外医学(耳鼻咽喉科学分册);2003年03期

10 付文玉,路艳蒙,乔东访,朴英杰;运用组织工程学原理构建间充质干细胞的三维培养体系[J];潍坊医学院学报;2003年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈可;王丁;韩之波;朱德林;韩忠朝;;人脐带间充质干细胞体外发挥免疫活性的研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

2 金明顺;张毅;贾秀芬;周燕华;闫妍;刘慧雯;;小鼠脂肪间充质干细胞的分离、培养以及多潜能分化的研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年

3 李争艳;刘杨;翟丽丽;杨迷玲;王立峰;;间充质干细胞在肿瘤发展过程中的作用[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

4 张彦;李尚珠;;间充质干细胞在血管工程中的机制及应用[A];2009全国中西医结合周围血管疾病学术交流会论文集[C];2009年

5 石玉;戴\戎;;周期性拉应力对间充质干细胞分化影响的研究[A];第九届全国生物力学学术会议论文汇编[C];2009年

6 黎娇;朱争艳;杜智;骆莹;王鹏;高英堂;;人脐带间充质干细胞分泌物对肝细胞增殖和凋亡的影响[A];天津市生物医学工程学会第30次学术年会暨生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2010年

7 谭远超;Kevin;姜红江;黄相杰;周纪平;;间充质干细胞在骨伤疾病治疗中的应用[A];首届全国中西医结合骨科微创学术交流会暨专业委员会成立大会论文汇编[C];2011年

8 唐佩弦;;间充质干细胞及其临床应用前景[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年

9 戴育成;;间充质干细胞的生物学特性和应用[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年

10 胡琳莉;王昕荣;钱坤;李舟;杨薇;朱桂金;;小鼠间充质干细胞向子宫内膜分化的实验研究[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 满学杰;天津滨海新区建最大间充质干细胞生产基地[N];新华每日电讯;2008年

2 满学杰;津昂赛打造间充质干细胞生产基地[N];医药经济报;2008年

3 第三军医大学西南医院输血科 李忠俊 整理 吴刘佳;间充质干细胞研究又见新方法[N];健康报;2013年

4 上海生科院 上海交大医学院健康科学研究所 曹楷;间充质干细胞：干细胞中的孙悟空[N];上海科技报;2014年

5 记者　陈建强;首家间充质干细胞库在津建成[N];光明日报;2006年

6 记者　冯国梧;细胞产品国家工程中心建设方案获准[N];科技日报;2007年

7 实习生 刘霞;间充质干细胞有望用于面部整形[N];科技日报;2007年

8 本报记者 王新佳;我国“原始间充质干细胞”注射液进入临床研究[N];中国高新技术产业导报;2005年

9 冯国梧;全球首个脐带间充质干细胞库规模化运营[N];科技日报;2008年

10 刘莹清;全球首个脐带间充质干细胞库泰达规模运营[N];北方经济时报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 郑楚萍;功能化纳米粒子对间充质干细胞分化的影响及细胞成像的应用[D];暨南大学;2015年

2 王皓;五指山小型猪OCT-4、SOX-2基因在骨髓间充质与脐带间充质干细胞中的过表达研究[D];中国农业科学院;2013年

3 孔德晓;间充质干细胞及胰岛素分泌细胞治疗糖尿病的临床及应用基础研究[D];山东大学;2015年

4 董苑;SDF-1复合PDPBB的构建及对间充质干细胞趋化影响的研究[D];昆明医科大学;2015年

5 王磊;诱导胎盘来源间充质干细胞向成牙骨质细胞分化的实验研究[D];山东大学;2015年

6 房贺;连接黏附分子A在促进MSC修复CC14肝损伤中的作用及其机制[D];第二军医大学;2015年

7 陈洁;间充质干细胞外泌体对急性肺损伤小鼠的影响及相关机制的实验研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

8 李雪;人脐带间充质干细胞免疫调节机制的研究[D];北京协和医学院;2015年

9 陈可;人脐带来源间充质干细胞的免疫调节作用[D];中国协和医科大学;2010年

10 王静;胎儿来源的间充质干细胞的生物学特性以及间充质干细胞在肝纤维化中治疗机制的研究[D];中国协和医科大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 李超;小鼠骨髓间充质干细胞中AC基因亚型的表达及AC3对其纤毛长度的影响[D];河北大学;2015年

2 林涛;壳聚糖水凝胶复合脂肪间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究[D];川北医学院;2015年

3 彭龙英;心肌营养素1促进人脐血间充质干细胞神经分化存活及PI3K/Akt信号通路机制研究[D];遵义医学院;2015年

4 乔晓慧;酸性环境对人脐带间充质干细胞的影响[D];内蒙古大学;2015年

5 张红霞;人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及其对人肺癌细胞恶性表型的影响[D];内蒙古大学;2015年

6 顾立超;BTK抑制剂对间充质干细胞miR-21的调节作用[D];河北联合大学;2014年

7 王文杰;鸭胚间充质干细胞生物学特性及其移植修复肝损伤研究[D];中国农业科学院;2015年

8 张猛;血管内皮前体细胞对间充质干细胞分化潜能的影响[D];石河子大学;2015年

9 马丽媛;利用MyoD基因诱导绵羊脐带间充质干细胞分化为成肌细胞的研究[D];东北林业大学;2015年

10 宋维文;MicroRNA-133诱导绵羊间充质干细胞分化为成肌细胞的研究[D];东北林业大学;2015年

，

本文编号：1120830