梗阻性黄疸大鼠血清对肝细胞模型IRE1表达的影响与中药的作用机制研究

发布时间：2017-11-04 10:12

  本文关键词：梗阻性黄疸大鼠血清对肝细胞模型IRE1表达的影响与中药的作用机制研究

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【摘要】：目的:通过研究不同血清干预后大鼠正常肝细胞中IRE1α的表达变化,探讨梗阻性黄疸肝损伤的发生机制及中药茵陈蒿汤对肝细胞的保护机制,为临床上梗阻性黄疸患者使用清热利湿中药提供理论依据。方法:1、选择30只成年雄性SD大鼠,体重(270-300)g,动物级别为清洁级,随机分为三组:(1)梗阻性黄疸组(O组)10只;(2)假手术对照组(S组)10只;(3)茵陈蒿汤灌胃组(Y组)10只。S组仅行手术探查、分离胆管,但不予胆管结扎,O组先行手术探查、分离胆管,然后采用双重线结扎法建立梗阻性黄疸模型,Y组采用茵陈蒿汤灌胃(每次剂量1m L/100g体重),三组均于术后5d经腹主动脉取血,部分血液标本:检测比较各组动物血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)指标含量;其余血液标本离心后保留血清备用。2、选取大鼠正常肝细胞系BRL-3A,购自中国科学院细胞库。分为A、B、C三组,其中(1)A组为加入含正常大鼠血清的培养基;(2)B组为加入含梗阻性黄疸大鼠血清的培养基;(3)C组为加入含梗阻性黄疸大鼠血清及茵陈蒿汤灌胃大鼠血清的培养基。分别于6h、24h、48h取材,离心后取肝细胞及培养液上清。分别标记为A6h、A24h、A48h、B6h、B24h、B48h、C6h、C24h、C48h。肝细胞应用蛋白质印迹法(western blot)测定肝组织中IRE1α蛋白表达变化,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肝组织IRE1α基因表达情况;培养液上清测量ALT、AST含量。结果:1、生化指标:(1)动物实验造模取血清部分:O组TBIL、DBIL、ALT、AST值较正常值明显升高,分别S组对比均明显升高,差异都有统计学意义(P0.05),大鼠梗阻性黄疸模型建立成功。(2)细胞实验部分培养液测定ALT、AST:以A组为对照组,B组及C组的ALT、AST水平在各个时间点的均高于A组(P0.05);与B比较,C组的ALT、AST水平在各个时间点的均低于B组(P0.05)。2、采用western blot检测大鼠肝细胞中IRE1α:在蛋白表达水平上,以Actin为内参。以A组为对照组,B组及C组的IRE1α表达水平在各个时间点的均高于A组(P0.05);与B比较,C组的IRE1α表达水平在各个时间点的均低于B组(P0.05)。3、R-T PCR检测大鼠肝细胞中IRE1αm RNA基因:以A组为对照组,B组及C组的IRE1αm-RNA表达水平在各个时间点的均高于A组(P0.05);与B比较,C组的IRE1αm-RNA表达水平在各个时间点的均低于B组(P0.05)。结论:1、正常大鼠肝细胞培养过程中加入梗阻性黄疸大鼠血清能够成功制造肝损伤模型。由IRE1α-JNK介导ERS途径的肝细胞凋亡,是梗阻性黄疸引起肝损伤的可能机制。2、正常大鼠肝细胞梗阻性黄疸肝损伤模型中加入茵陈蒿汤含药血清仍能改善肝功能,可能是通过抑制IRE1α蛋白的过度激活,从而降低ERS反应,进而改善肝细胞因梗阻性黄疸血清而引起的肝功能异常。3、针对临床上梗阻性黄疸患者的治疗,合理的辩证的选取清热利湿中药(茵陈蒿汤)作为辅助疗法,可以更好的降低相关并发症发生率,提高临床治疗效果,促进患者的肝功能恢复。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
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本文编号：1138969