青藤碱对体外人肝星状细胞和小鼠肝纤维化影响的研究

发布时间：2017-11-09 02:32

  本文关键词：青藤碱对体外人肝星状细胞和小鼠肝纤维化影响的研究

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【摘要】：背景：肝纤维化(HF)是多种慢性肝脏疾病进展为肝硬化的必经病理过程,是由于肝脏内细胞外基质(ECM)生成增多,降解减少,代谢失衡大量沉积而形成。研究表明肝星状细胞(HSC)是纤维化肝脏ECM的主要来源,转化生长因子β1 (TGF-β1)在促进HSC活化,增殖和产生ECM过程中起重要作用。有文献报道高剂量的青藤碱(SN)能够显著下调肾小管上皮细胞α-平滑肌激动蛋白(a-SMA)和TGF-β1表达,抑制上皮间质转化,起到减轻肾间质纤维化的作用。但对HF过程中TGF-β1和HSC的影响却鲜有报道。目的：本课题旨在探讨SN对体外培养的人HSC (LX-2)增殖、凋亡及CCL4诱导的小鼠肝纤维化的影响。方法：(1)体外实验：使用不同浓度(0.4、0.8、1.6、3.2、6.4mM)的SN溶液处理LX-2细胞12和24小时后,分别用MTS法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡变化；western blot检测细胞中凋亡相关分子Bcl-2和Bax表达变化。(2)体内实验：40只雄性C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组,肝纤维化模型组,SN干预组(低剂量组和高剂量组),每组10只,正常对照组给予橄榄油溶液5ml/kg ip,其余各组给予10%的四氯化碳橄榄油混合液5ml/kg腹腔注射,2次/周,共6周,从第5周开始对照组和模型组给予生理盐水灌胃,干预组分别给予不同剂量的SN溶液灌胃,造模结束后留取肝组织样本,检测肝组织中羟脯氨酸的含量；western blot检测肝组织中Ⅰ型胶原,TGF-β1表达变化；肝组织经HE和Masson染色后观察各组肝脏组织的炎症和纤维化程度。结果：(1)体外实验：MTS实验结果显示SN能抑制LX-2的增殖并具有剂量依赖效应；流式细胞术实验结果显示SN能诱导细胞凋亡比例增加,当剂量为3.2mM时有统计学差异(P0.05); western blot实验显示1.6和3.2mM的SN均能减少LX-2细胞中Bcl-2的表达(P0.05),均增加Bax的表达,当浓度为3.2mM时更加明显(P0.05), Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.01)。(2)HF模型组和正常对照组相比：小鼠肝组织Ⅰ型胶原、羟脯氨酸含量和TGF-β1表达均增加(P0.05)；肝组织HE染色显示肝细胞坏死较重,炎性细胞浸润较多,Masson染色显示胶原沉积增加。SN干预组和模型组相比：肝组织羟脯氨酸含量减少,Ⅰ型胶原、TGF-β1表达下降,其中高剂量干预组Ⅰ型胶原、TGF-β1下降较为明显(P0.05)；组织HE染色显示肝细胞坏死减轻,Masson染色显示胶原沉积减少。结论：(1)SN可以抑制体外培养的LX-2细胞的增殖并诱导其凋亡增加；(2)SN可以减缓小鼠肝组织纤维化进程,其机制可能与SN能够下调TGF-β1表达,减少HSC活化,胶原生成并诱导HSC凋亡增加有关。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2

【参考文献】

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1 王宇,贾继东;水飞蓟素的抗肝脏纤维化作用及其机制[J];中华医学杂志;2005年17期

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本文编号：1159952