1，25-二羟基维生素D3对体外大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其机制的研究

发布时间：2017-11-14 08:29

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【摘要】：目的:探讨1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其可能的机制。方法:1,25-(OH)2D3作用于离体大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),用MTT比色法测定细胞的增殖变化;应用细胞划痕实验观察细胞迁移能力的改变;选择流式细胞术(Flow cytometry,FCM)观测细胞周期和细胞凋亡率的变化;Western Blotting法判断凋亡调节蛋白caspase-3、casepase-9,PI3K/Akt/mTOR信号通路中总Akt(ser473)、mTOR(ser2448)及磷酸化的pAkt(ser473)及pmTOR(ser2448)和Ⅰ型胶原蛋白量改变;应用Rt-PCR法检测α-1(Ⅰ)mRNA的表达变化,观察凋亡调节蛋白和PI3K/Akt/mTOR信号通路对HSC的抑制增殖和诱导凋亡的调节机制。结果:1.1,25-(OH)2D3能有效降低HSC-T6的迁移能力并以浓度和时间依赖的方式抑制其增值,药物浓度分别为2.5×10-9-2.5×10-6mol/l,体外经24小时干预后对T6细胞抑制率分别达到32.01%,42.23%,51.23%,64.11%,上述浓度梯度在12-48h时限范围内抑制T6细胞呈现出时效和量效关系(P0.05)。2.细胞间划痕剩余面积随着1,25(OH)2D3浓度的提高逐渐变大,细胞融合率呈减低趋势。对照组较2.5×10-9、2.5×10-8、2.5×10-7、2.5×10-6实验组的划痕剩余面积逐步增大,组间比较有差别,有统计学意义(P0.05)。3.FCM检测发现,对照组HSC-T6经48h培养后其凋亡率为1.03%,与其他实验组对比,HSC-T6凋亡率上升,分别至3.91%,7.11%,12.01%,22.21%,与对照组相比有统计学意义(P0.05)。4.细胞周期分析结果示对照组细胞G0/G1期、S期的细胞百分比与各个试验组经48h干预后G0/G1期百分比均不同程度升高,S期百分比则均明显下降,浓度梯度试验组与正常对照组想对比G0/G1期、S期的百分比均可见统计学差异,G2/M期的百分比则无明显变化,由此说明经药物干预后T6细胞被阻滞于G0/G1期(P0.05)。5.1,25-(OH)2D3作用24h后,I型胶原mRNA表达和I型胶原蛋白印记表达均呈剂量依赖性降低(P0.05)。6.蛋白印记法测得经1,25-(OH)2D3干预后T6细胞促凋亡蛋白caspase-3及caspase-9活性增加。7.蛋白印迹法测总Akt、mTOR及磷酸化的Akt(Ser473)、mTOR(Ser2448),1,25-(OH)2D3显著抑制磷酸化的Akt(Ser473)、mTOR(Ser2448)而总的Akt、mTOR无明显变化。(P0.05)结论:1,25-(OH)2D3通过抑制HSC-T6的增殖并诱导其凋亡,从而发挥抗肝纤维化作用,可能是通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路来完成。
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.2

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本文编号：1184652