共刺激分子B7-H3在急性胰腺炎中的作用及机制研究

发布时间：2017-11-16 15:30

  本文关键词：共刺激分子B7-H3在急性胰腺炎中的作用及机制研究

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【摘要】：第一部分抗B7-H3单克隆抗体对小鼠急性胰腺炎模型的影响及机制研究目的:探究抗B7-H3单克隆抗体(m Ab)对小鼠急性胰腺炎模型的影响及机制研究。方法:将小鼠随机分为对照组、AP组、Ig G治疗组、抗B7-H3 m Ab治疗组。采用腹腔注射L-精氨酸的方法制备小鼠急性胰腺炎(AP)模型,Ig G治疗组于造模前2h注射Ig G,抗B7-H3 m Ab治疗组于造模前2h注射抗B7-H3 m Ab,于造模后2d、3d、4d,收集各组小鼠血液、胰腺及肺组织标本。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测对照组及AP组小鼠胰腺组织B7-H3蛋白表达。应用全自动生化免疫分析仪检测各组小鼠血清淀粉酶及脂肪酶活性,HE染色评估各组小鼠胰腺及肺组织病理变化,采用Western blot法检测各组小鼠胰腺组织磷酸化NF-κB蛋白表达变化,ELISA检测各组小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果:B7-H3蛋白在AP小鼠胰腺组织中存在高表达,AP组血清淀粉酶及脂肪酶水平明显高于对照组,抗B7-H3 m Ab处理后明显降低,AP组胰腺组织出现明显炎症细胞浸润及胰腺组织坏死,抗B7-H3 m Ab治疗组炎性损伤明显减弱,AP组肺组织出现明显肺泡壁增厚及炎症细胞浸润,抗B7-H3 m Ab治疗组肺泡壁增厚程度减轻,AP组TNF-α、IL-6、IL-1β水平随时间延长而升高,而抗B7-H3 m Ab治疗组促炎因子水平相对降低,抗B7-H3 m Ab治疗组磷酸化NF-κB蛋白水平降低。结论:B7-H3在AP模型中存在高表达,抗B7-H3 m Ab可以减弱炎症反应,缓解胰腺及肺组织的损伤。第二部分抗B7-H3单克隆抗体对胰腺腺泡细胞和腹腔巨噬细胞共培养模型的影响及机制研究目的:探究抗B7-H3单克隆抗体(m Ab)对胰腺腺泡细胞和腹腔巨噬细胞共培养模型的影响及机制研究。方法:体外分离并培养小鼠胰腺腺泡细胞,分为对照组、精氨酸组、Ig G治疗组、抗B7-H3 m Ab治疗组,精氨酸组加入5mg/m L的L-精氨酸;Ig G治疗组加L-精氨酸前加入Ig G;抗B7-H3 m Ab治疗组加L-精氨酸前加入抗B7-H3 m Ab。ELISA法检测6h、12h、24h上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β水平。分离并培养腹腔巨噬细胞,应用CD11b抗体对腹腔巨噬细胞进行鉴定。将巨噬细胞分为对照组、LPS组、精氨酸组、上清液组。LPS组作为阳性对照,上清液组加入腺泡细胞精氨酸组上清液。ELISA法检测6h、12h、24h上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。将两种细胞共培养,分为对照组、AP组、Ig G治疗组、抗B7-H3 m Ab治疗组。精氨酸组加入5mg/m L的L-精氨酸;Ig G治疗组加L-精氨酸前加入Ig G;抗B7-H3 m Ab治疗组加L-精氨酸前加入抗B7-H3 m Ab。ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平,Western blot法检测腺泡细胞磷酸化NF-κB蛋白表达变化,CCK-8检测腺泡细胞生存率。结果:成功分离并培养小鼠胰腺腺泡细胞,在腺泡细胞单培模型中精氨酸组检测到低水平炎症因子表达,抗B7-H3 m Ab治疗组炎症因子水平与Ig G治疗组无统计学差异。成功分离并培养小鼠腹腔巨噬细胞,在巨噬细胞单培模型中,精氨酸组未见炎症因子表达,而上清液组表达明显升高。在共培养模型中抗B7-H3 m Ab治疗组TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显降低,抗B7-H3 m Ab治疗组巨噬细胞中磷酸化NF-κB蛋白水平降低,腺泡细胞生存率升高。结论:抗B7-H3 m Ab可能通过NF-κB信号通路减少巨噬细胞炎症因子表达水平,进而缓解胰腺腺泡细胞损伤。第三部分急性胰腺炎患者外周血可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平及其临床意义目的:探究急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者血清中可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平变化及其对病情进展和严重程度的评估价值。方法:以20例健康人血液标本为对照组,收集AP患者发病1天、3天、7天的血液标本共66例,包括轻症AP(MAP)24例,中度重症AP(MSAP)24例,重症AP(SAP)18例;使用ELISA试剂盒检测血浆中s B7-H1、s B7-H2和s B7-H3水平,评价其与病情进展及严重程度的相关性。结果:MAP、MSAP、SAP 3个亚组血清s B7-H1水平明显高于正常对照组。SAP亚组s B7-H1水平随病程进展逐渐增加,发病第7天最高,与第3天比较,差异有统计学意义。第7天时SAP亚组显著高于MSAP亚组。MAP、MSAP、SAP 3个亚组患者血清s B7-H2水平明显低于正常对照组,且3个亚组第1天s B7-H2均为最高值,此后呈下降趋势。MAP亚组第1天s B7-H2与第3天比较,差异有统计学意义。在病程第7天,MAP亚组血清s B7-H2明显高于MSAP。MAP、MSAP、SAP 3个亚组患者血清s B7-H3水平明显高于正常对照组。SAP亚组患者s B7-H3呈现出逐渐上升的趋势,发病第3天与第7天比较时,差异有统计学意义。发病第1天时,SAP亚组s B7-H3水平显著高于MSAP亚组。第3天和第7天同一时点不同亚组比较,MSAP亚组显著高于MAP,SAP亚组显著高于MSAP亚组。通过ROC曲线检测发现s B7-H3诊断SAP的准确性随病程延长而逐渐升高,具有较好的诊断价值。结论:动态分析AP外周血可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平具有评估病情进展和严重程度的价值。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R576

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本文编号：1192826