角蛋白1对实验性结肠炎小鼠肠黏膜屏障功能的影响

发布时间：2017-11-29 04:29

  本文关键词：角蛋白1对实验性结肠炎小鼠肠黏膜屏障功能的影响

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【摘要】：[目的]通过葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium salt, DSS)诱导结肠炎小鼠模型和甲泼尼龙(Methylprednisolone, MP)干预实验,观察炎症并检测各组结肠黏膜中细胞骨架蛋白角蛋白1(Keratin 1, KRT1)和紧密连接蛋白claudin-2. occludin及zonula occluden-1 (ZO-1)的表达情况,初步探讨角蛋白1对实验性结肠炎小鼠肠黏膜屏障功能的作用机制。[方法]1、DSS诱导结肠炎小鼠模型：①、雄性SPF级C57BL/6小鼠32只随机分为正常对照组(n=15)、DSS模型组(n=17)。DSS组自由饮用4% DSS溶液7天,正常对照组饮用去离子水7天；于第8天处死小鼠获取标本；②、评估疾病活动指数(Disease cctivity index, DAI)、体重变化、大体损伤评分、结肠长度和重量、脾脏长度和重量以及结肠黏膜组织病理学评分；③、采用免疫组织化学方法检测各组结肠黏膜中KRT1、claudin-2、occludin及ZO-1蛋白的表达水平。2、甲泼尼龙干预实验：①、雄性SPF级C57BL/6小鼠45只随机分为正常对照组(n=15)、DSS+羟丙基甲基纤维素(hydroxypropyl methyl cellulose, HPMC)组(n=15)、DSS+MP组(n=15)。DSS+HPMC组、DSS+MP干预组自由饮用3%DSS溶液5天；DSS+MP干预组于第6天起予MP溶液(10mg/Kg,1次/天,溶于HPMC中)灌胃,共干预5天,DSS+HPMC组于第6天起予MP组等体积的HPMC溶液(1次/天)灌胃,期间对照组自由饮用去离子水,于第13天处死小鼠获取标本。②、观测指标和检测方法同第一部分。3、结果统计与分析：应用SPSS21.0软件对上述结果进行统计分析,并对结肠黏膜中KRT1、claudin-2、 occludin和ZO-1蛋白的表达进行相关性分析。[结果]1、DSS诱导结肠炎小鼠模型：与正常对照组相比,DSS模型组体重下降明显；DAI评分和结肠大体评分明显增加(p0.01),伴有结肠长度缩短(p0.01)、重量减轻(p0.05)；脾脏长度增加(p0.01),重量增加(p0.01)；结肠组织病理见黏膜缺损、上皮破坏和不同程度的中性粒细胞浸润,组织病理评分明显增加(p0.01)；免疫组化显示结肠黏膜KRTI、occludin和ZO-1蛋白表达较正常对照组明显减少(p0.01),而claudin-2蛋白表达明显增加(p0.01)。2、甲泼尼龙干预实验：与正常对照组相比,DSS+HPMC组体重下降明显；DAI评分和结肠大体评分明显增加(p0.01),伴有结肠长度缩短(p0.01)、重量增加(p0.01)；脾脏长度增加(p0.01),重量增加(p0.01)；结肠组织病理见黏膜缺损、上皮破坏和不同程度的炎性细胞浸润,组织病理评分明显增加(p0.01)；免疫组化显示结肠黏膜KRTI、occludin和ZO-1蛋白表达较正常对照组明显减少(p0.01), claudin-2蛋白明显增加(p0.01)。予MP干预后,与DSS+HPMC组相比,小鼠体重下降更为明显；DAI评分和结肠大体评分降低(2.17±0.42 vs 2.64±0.48,1.23+0.44 vs 2.00+0.77,p0.05),同时结肠长度有所缩短(5.73cm±0.50cm vs 5.94cm±0.22cm, p0.05)、重量减轻(0.32g±0.07g vs0.38g±±0.03g,p0.05)：脾脏长度缩短(1.30cm±0.12cm vs 1.45±0.15cm, p0.01),重量减轻(0.063g_±0.0012g vs 0.085g±0.023g p0.01)；结肠组织病理示中性粒细胞浸润减少(6.80±±1.10 vs 8.00±1.50,p0.05)；免疫组化显示结肠黏膜KRTI、occludin蛋白表达增加(10.23±1.24 vs 8.64±1.03、8.15±0.90 vs 7.27±±0.65,p0.05),ZO-1蛋白稍增加,但差异无统计学意义(8.15±0.99 vs 7.55±0.82, p0.05), claudin-2蛋白表达减少(7.23±0.83 vs 9.55±1.21,p0.01)。结肠黏膜KRT1与occludin、ZO-1表达呈正相关,与claudin-2呈负相关(r=+0.884,r=+0.738,r=-0.837,p0.01)。[结论]1、KRT1、claudin-2、occludin、ZO-1蛋白参与UC的发病过程；2、在UC治疗中,糖皮质激素类药物不仅发挥抗炎作用,而且可能通过影响细胞骨架蛋白和紧密连接的表达来调节肠黏膜屏障功能。3、细胞骨架蛋白KRT1可能与紧密连接蛋白联合作用维持肠黏膜屏障功能。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R574.62

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本文编号：1236220