白藜芦醇对小鼠脂肪肝缺血再灌注损伤的保护及Gadd45a表达分析

发布时间：2017-12-05 07:28

本文关键词：白藜芦醇对小鼠脂肪肝缺血再灌注损伤的保护及Gadd45a表达分析

【摘要】：目的:建立小鼠脂肪肝缺血再灌注损伤模型,检测白藜芦醇对Gadd45a表达的影响,探讨白藜芦醇对脂肪肝缺血再灌注损伤的保护作用。方法本实验分为两部分。第一部分为预实验阶段(建立小鼠脂肪肝缺血再灌注损伤模型)。第二部分为正式试验阶段,即在成功建立小鼠脂肪肝缺血再灌注损伤模型后,研究白藜芦醇预处理对脂肪肝缺血再灌注损伤的保护作用以及可能的相关机制。1.预实验阶段:选取8-12周健康的、雄性的KM小鼠(南华大学实验动物中心购买)14只,体重17-24g。采用国际上被广泛认可的小鼠脂肪肝模型:缺乏蛋氨酸及胆碱饮食诱发的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型。实验前予以缺乏蛋氨酸及胆碱饮食喂养14d,实验当天参照Pringle’s法创立小鼠脂肪肝缺血再灌注模型,夹闭肝蒂血管20分钟。缺血再灌注2h后再剪取小鼠肝组织化验,观察肝脏组织病理形态学变化。2正式实验阶段:选择8-12周健康的雄性km小鼠21只,体重在17-24g之间;完全随机分成3组,每组7只:一组小鼠在实验前给予普通饮食14d;在实验前连续2d及实验当天,每天清晨给予0.9%氯化钠注射液腹腔注射1次(按照30mg/kg剂量计算);第二组小鼠在实验前给予缺乏蛋氨酸及胆碱饮食14d;在实验前连续2d及实验当天,每天清晨给予0.9%氯化钠注射液腹腔注射1次(按照30mg/kg剂量计算);第三组小鼠在实验前给予缺乏蛋氨酸及胆碱的饮食14d,在实验前连续2d及实验当天,每天清晨给予10%白藜芦醇注射液腹腔注射1次(按照30mg/kg剂量计算)。实验当天第一组仅行简单的开关腹即可,不夹闭肝蒂血管;第二组以及第三组参照pringle’s法创立小鼠脂肪肝缺血再灌注模型,夹闭肝蒂血管20分钟。待各组小鼠造模成功后,再剪取小鼠肝组织及抽取血清化验;检测各组小鼠肝功能水平,观察肝脏组织病理形态学变化;使用western-blot检测肝组织gadd45a的表达水平。最后采用spss17.0软件统计分析各组数据结果。结果:1.预实验阶段:共选取14只小鼠建立脂肪肝缺血再灌注损伤模型。基本掌握了小鼠脂肪肝喂养方法、外科无菌术、外科开腹肝蒂血管夹闭、麻醉剂量控制、外科补液等问题的技巧;其中死亡2例。死亡原因为开腹时损伤膈肌致气胸所致。其余12例小鼠缺血再灌注2小时后仍较活泼。肝组织病例切片显示:12例小鼠肝脏都有明显的空泡状变性,肝小叶多处有炎症细胞浸润,肝组织结构紊乱,未见纤维化及肝硬化表现。提示小鼠脂肪肝缺血再灌注损伤造模成功。2.正式实验阶段:(1)三组均未见死亡病例。经过14d的mcd饮食,b、c组小鼠肝细胞均产生空泡状变性。(2)肝功能:选用高灵敏度生化分析仪检测小鼠血清alt;第一组小鼠血清alt均在正常范围内波动;第二季第三组小鼠血清alt均明显高于第一组,并且通过白藜芦醇预处理过的第三组小鼠比第二组小鼠血清alt均有不同程度的下降;统计软件分析结果提示各组小鼠血清结果有比较明显的差异,p0.01,有统计学意义。提示白藜芦醇预处理能显著减轻脂肪肝缺血再灌注损伤的程度,保护肝功能。(3)肝组织病理学变化:第一组小鼠肝小叶及肝血窦形态正常,肝细胞未见炎症浸润及坏死,未见大泡性脂肪变性;第二及第三组小鼠肝细胞均有不同程度的空泡状变性、炎症侵犯及肝细胞坏死,但是经过白藜芦醇预处理过的第三组肝细胞空泡状变性、坏死及炎症程度比第二组明显下降;提示白藜芦醇能减少脂肪肝缺血再灌注损伤中的空泡状变性以及炎症坏死程度。4.Western-blot检测:第一组Gadd45a的表达较为微弱;第二组及第三组Gadd45a表达水平比第一组明显增高,但是经过白藜芦醇预处理的第三组Gadd45a表达水平比第二组高;经统计学分析各组Gadd45a表达水平有统计学意义(P0.01)。提示白藜芦醇能增加脂肪肝缺血再灌注损伤中Gadd45a的表达水平。结论:1.白藜芦醇能明显减轻小鼠脂肪肝脏缺血再灌注损伤的程度,从而保护肝功能。2.白藜芦醇可提高脂肪肝缺血再灌注损伤中肝组织Gadd45a的表达水平。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.5

【参考文献】

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