Toll样受体9在大鼠急性胰腺炎中的作用及CpG-ODN、siRNA干预后的影响

发布时间：2017-12-07 21:13

  本文关键词：Toll样受体9在大鼠急性胰腺炎中的作用及CpG-ODN、siRNA干预后的影响

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【摘要】：第一部分Toll样受体9在大鼠急性胰腺炎中的作用及CpG-ODN干预后的影响目的：探讨Toll样受体9(TLR9)在大鼠急性胰腺炎发病过程中的作用及CpG-ODN预处理后的变化情况。方法：SD大鼠随机分为：正常对照组(CON组)、急性胰腺炎3h组(AP3h组)、AP6h组、AP12h组、配体干预对照组(CpG组)、配体干预急性胰腺炎3h组(CpG+AP3h组)、CpG+AP6h组、CpG+AP12h组。AP各组按十二指肠穿刺逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠建立急性胰腺炎模型；CpG各组在建模前1h给予CpG-ODN腹腔注射,其余同AP组。分别于建模后3h、6h、12h取胰腺组织进行HE、电镜观察胰腺组织病理学变化,qPCR、Western Blot检查胰腺组织TLR9mRNA和蛋白量的变化,ELISA测定血清TNF-α、IL-6水平,淀粉酶试剂盒测定血清和腹水淀粉酶活性。结果：胰腺组织病理学评分随时间升高(P0.05),CpG预处理后各组病理学评分更高(P0.05)；胰腺组织TLR9mRNA表达量随时间上调(P0.05),CpG预处理后各组TLR9mRNA表达量更高(P0.05)；胰腺组织TLR9mRNA的表达与病理学评分呈正相关；WB检测TLR9蛋白表达量建模后升高(P0.05),其中以6h组最高,明显高于3h(P0.05)和12h (P0.05), CpG预处理后各组蛋白表达量上调(P0.05); ELISA检测血清TNF-α水平建模后上升(P0.05),12h组达最高,CpG预处理后各组TNF-α含量升高(P0.05)；血清IL-6含量建模后升高(P0.05),AP6h达最高,CpG预处理后3h、6h组含量升高;血清、腹水淀粉酶建模后均升高(P0.05),CpG预处理后变化无统计学意义(P0.05)。结论：1、Toll样受体9参与了大鼠胰腺炎的发病过程；2、在胰腺炎发病早期toll样受体9表达量上调,与急性胰腺炎的进展呈正相关；3、本研究首次证实了CpG-ODN预处理可刺激胰腺TLR9mRNA上调并加速胰腺炎的进展；4、TLR9可能是胰腺炎由水肿型转为坏死型的一个关键性因素。第二部分siRNA靶向干扰TLR9基因后的大鼠急性胰腺炎的变化情况目的：探讨siRNA沉默Toll样受体9(TLR9)基因后大鼠急性胰腺炎的变化情况。方法：SD大鼠随机分为：正常对照组(CON组)、急性胰腺炎3h组(AP3h组)、AP6h组、AP12h组、siRNA干预对照组(siRNA组)、siRNA干预急性胰腺炎3h组(siRNA+AP3h组)、siRNA+AP6h组、siRNA+AP12h组。AP各组按十二指肠穿刺逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠建立急性胰腺炎模型；siRNA各组在建模前48h给予TLR9 siRNA腹腔和静脉注射,其余同AP组。分别于建模后3h、6h、12h行qPCR检查胰腺组织TLR9mRNA的变化,行HE观察胰腺组织病理学变化,ELISA测定血清TNF-α、IL-6水平,淀粉酶试剂盒测定血清和腹水淀粉酶活性。结果：TLR9 siRNA干扰后生存时间延长,siRNA各组胰腺组织TLR9mRNA表达量下调(P0.05); siRNA各组病理学评分降低(除3h组外)(P0.05); ELISA检测siRNA各组血清TNF-α和IL-6水平降低(P0.05)。结论：1、本研究首次通过腹腔局部联合静脉用药将TLR9 siRNA转染至大鼠体内,有效的抑制了大鼠胰腺组织TLR9 mRNA的表达。2、本研究首次证实抑制TLR9 mRNA的表达后AP大鼠血清IL-6和TNF-α水平下降,胰腺病理学评分下降,生存时间延长。3、本研究提示AP的发生发展可能有多因素参与其中,TLR9在急性胰腺炎早期的进展中,特别是由水肿向坏死过程中起了重要的作用。4、本研究首次揭示了降低TLR9基因的表达能明显延缓早期胰腺炎的进展,可能为急性胰腺炎提供一个新的预防和治疗靶点。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R576

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本文编号：1263861