糖皮质激素经P-gp阻止肝衰竭发生与发展的研究

发布时间：2017-12-12 06:28

  本文关键词：糖皮质激素经P-gp阻止肝衰竭发生与发展的研究

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【摘要】：急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)、亚急性肝衰竭(subacute liver failure,SALF)和慢加急性肝衰竭(acute on chronic liver failure,ACLF)患者病情危重、疾病进展迅速,救治十分困难,病死率极高,目前除肝移植外尚无有效的内科治疗方法。糖皮质激素能快速抑制过度免疫反应和炎症反应,同时还有肝细胞保护作用;本课题组及国外有报道提示:糖皮质激素能有效改善HBV相关慢加急性肝衰竭前期患者的肝功能与预后。因而,用糖皮质激素治疗ALF、SALF与ACLF是一个合理的治疗选择,但糖皮质激素在治疗ALF、SALF与ACLF中的疗效仍存争议,其根本原因是糖皮质激素阻止肝衰竭发生与发展的机制尚未阐明,以至于不能合理选择最佳治疗人群与最佳治疗时机。糖皮质激素阻止肝衰竭发生与发展的机制,除抑制免疫应答与炎症反应外,可能更关键的是能增强肝细胞保护功能。P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)具有重要的组织细胞保护功能。糖皮质激素能够上调胎盘、脑膜等组织P-糖蛋白的表达。由此,我们推测糖皮质激素能诱导人肝细胞增强表达P-gp,并经P-gp途径增强肝细胞保护作用,从而阻止肝衰竭的发生与发展。研究方法与研究内容:1.以2000年至2012年在我科住院的73例ALF和165例SALF患者为研究对象,回顾性分析比较应用与未应用糖皮质激素治疗患者的自然生存率是否存差异,并探讨血清ALT水平、MELD评分、肝性脑病程度及糖皮质激素开始治疗时间等对治疗效果的影响,从而评估糖皮质激素在改善ALF和SALF患者自然存活率中的作用、并找出糖皮质激素治疗的最佳应答者与最佳介入时机。2.用免疫组化技术检测慢性无症状HBV携带者(AsC)、轻度慢性乙型肝炎(CHB)患者、HBV相关急性肝衰竭前期(Acute pre-liver failure associated HBV,pre-ALF-HBV)患者、HBV相关肝衰竭患者的肝组织P-糖蛋白水平,并分析肝组织P-糖蛋白表达与慢性HBV感染不同临床类型的关系,从而阐明肝细胞P-糖蛋白表达是否具有肝细胞保护功能、及其在肝衰竭发生与发展中的作用。3.比较糖皮质激素治疗前后肝衰竭前期患者肝组织P-糖蛋白表达水平的变化,及其改变与肝衰竭前期患者肝功能改善间的关系。4.体外培养正常人肝细胞株l-02细胞,比较分析地塞米松对l-02细胞p-糖蛋白表达及trail诱导的细胞凋亡的影响,并分析p-糖蛋白的第三代抑制剂tariquidar在地塞米松抵抗trail诱导l-02细胞凋亡中的作用,从而证实地塞米松能经p-糖蛋白途径阻止l-02细胞凋亡。主要研究结果:1.糖皮质激素治疗组与非糖皮质激素治疗组肝衰竭患者的生存率分别为38.2%与20.2%,两者间相差显著(p=0.011)。2.对于alt"g303uln(upperlimitofnormal)并且肝性脑病Ⅳ度和meld评分35的患者,糖皮质激素治疗组与非糖皮质激素治疗组的生存率分别为65.0%与17.4%,两者间相差非常显著(p=0.002)。3.糖皮质激素治疗病程≤2周患者的生存率显著高于其治疗病程2周的患者(51.4%比15.0%,p=0.010)。4.hbv相关急性肝衰竭前期患者肝组织的p-糖蛋白水平显著高于hbv相关肝衰竭患者(p0.01)与慢性无症状hbv携带者和轻度慢性乙型肝炎患者(p0.01)。5.在14例hbv相关肝衰竭前期患者中,糖皮质激素治疗后肝组织p-糖蛋白表达水平显著高于糖皮质激素治疗之前的水平(p0.01)。6.pearson相关分析发现:肝衰竭前期患者在糖皮质激素治疗前后,血清alt水平与肝组织中p糖蛋白表达水平之间呈显著负相关(rs=-0.569,p0.05),ast水平与p糖蛋白表达(rs=-0.557,p0.05)水平之间呈显著负相关,tbil与p糖蛋白(rs=-0.565,p0.05)水平之间呈显著负相关;肝组织中p糖蛋白表达水平与pta(%)(rs=775,p0.05)水平之间,呈显著正相关。7.细胞爬片免疫组化、流式细胞术、westernblot、实时荧光定量pcr均证实人l-02肝细胞存在p-糖蛋白的表达。8.糖皮质激素可以增强人l-02肝细胞p-糖蛋白的表达,并呈浓度和时间依赖关系。9.糖皮质激素拮抗trail诱导的人l-02肝细胞的凋亡,tunel检测显示用10μm的糖皮质激素孵育48小时,可显著最低的l-02细胞凋亡细胞数目(p0.05)。10.p-糖蛋白的第三代抑制剂tariquidar可以阻断p-糖蛋白对人l02肝细胞的凋亡拮抗作用。与不加入tariquidar只用地塞米松刺激组相比,50nm的p-糖蛋白抑制剂孵育24小时,即可使l-02细胞的凋亡水平出现明显增加(p0.05)。结论：1.糖皮质激素能够改善ALF和SALF的预后,最好的应答者是疾病进展风险性高、但病情相对较轻的患者,最佳的治疗时机是症状出现两周内。2.肝损伤严重患者肝组织P-糖蛋白表达水平呈代偿性增加,提示P-糖蛋白具有肝细胞保护功能、并在阻止肝细胞死亡与肝衰竭的发生与发展中起重要作用。3.糖皮质激素治疗阻止HBV相关肝衰竭前期患者的疾病进展,可能与其显著提高肝衰竭前期患者肝组织的P-糖蛋白表达水平有关。4.地塞米松可以通过诱导人L-02细胞P-糖蛋白的增强表达来保护L-02细胞抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.3

【参考文献】

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1 Da-Wei Wang;Yi-Mei Yin;Yong-Ming Yao;;Advances in the management of acute liver failure[J];World Journal of Gastroenterology;2013年41期

2 ;Methylprednisolone inhibits activated CD4~+ T cell survival promoted by toll-like receptor ligands[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年04期

3 ;Prognostic models for acute liver failure[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年02期

4 Aldo D Mottino;Viviana A Catania;;Hepatic drug transporters and nuclear receptors:Regulation by therapeutic agents[J];World Journal of Gastroenterology;2008年46期

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本文编号：1281536