非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织microRNA表达谱的分析

发布时间：2017-12-15 00:21

  本文关键词：非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织microRNA表达谱的分析

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【摘要】：目的:本实验旨在筛查非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝组织中差异表达的微小RNA(micro RNA,mi RNA),为NAFLD的早期干预、诊断、治疗提供生物学标记,也为进一步研究mi RNA以何种方式作用于细胞凋亡过程奠定基础。方法:取SD大鼠16只(4周龄、每只重约200g、雄性),经适应性饲喂1周后,随机分成对照组(命名为为E组,共8只)及模型组(命名为为Y组,共8只),E组采用普通饲料喂养,Y组给予高糖、高脂饲料喂养,共喂养12周以建立非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型。12周末处死两组,各取肝脏组织进行HE染色的病理学检查(以观察各组肝脏脂肪样变、炎症活动程度并进行组织学评分),随后经腹腔腹主动脉取血,使用全自动生化分析仪,采用酶法测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆固醇(total cholesterol,TG)、总甘油三酯(total triglyceride,TC)和空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)的水平;然后,E组和Y组随机各取3只大鼠,采用Trizol法分别提取各新鲜样本的总RNA,经Nano Drop2000和Agilent Bioanalyzer 2100质检合格后采用Affymetrix mi RNA表达谱芯片Gene Chip mi RNA 4.0进行mi RNA的检测,根据芯片结果及相关文献筛选mi RNA使用实时定量PCR以验证。结果:1.一般情况:造模过程中,E组大鼠喜动、活跃,毛发干净、光泽,体重逐步增加;Y组大鼠精神萎靡、少动,毛发乱、光泽度差,进食少,体重增加较缓慢。2.肝指数变化:与E组相比,Y组大鼠的体重、肝湿重无明显变化(P0.05),而肝指数增加显著(P0.05)。3.生化指标:相较于E组,Y组大鼠ALT、TG、TC、FPG四项指标未见显著变化(P0.05),而AST升高明显(P0.05)。4.肝脏组织HE染色:Y组大鼠的肝脏可见重度脂肪样变性,甚至发生气球样变,伴肝细胞的点、灶状坏死,周围有多种炎细胞浸润。5.mi RNA芯片结果:与E组相比,Y组有10个变化倍数在2倍以上的差异性表达的mi RNA(P0.05)。Y组中rno-mi R-743a-3p、rno-mi R-741-3p、rno-mi R-101a-3p、rno-mi R-29b-3p、rno-mi R-871-3p表达明显升高;rno-mi R-344g、rno-mi R-183-5p、rno-mi R-32-3p、rno-mi R-182、rno-mir-182表达明显降低。6.综合mi RNA芯片结果及结合相关参考文献,选择mi R-182、mi R-29b-3p、mi R-741-3p进行实时定量PCR验证,结果显示,与E组相比,Y组中mi R-182、mi R-29b-3p、mi R-741-3p的表达明显增加(P0.05),与基因芯片结果基本一致。结论:1.高糖高脂饮食是NAFLD的病因,采用高糖高脂饲料喂养可安全、高效的建立NAFLD动物模型;2.采用高糖、高脂饮食喂养建立的NAFLD大鼠,其mi RNA表达谱较正常组有显著改变,表明这些差异性表达mi RNA可能在NAFLD的发病进程中发挥作用,但其具体机制仍待进一步探索;3.采用实时定量PCR验证mi R-182、mi R-29b-3p、mi R-741-3p的表达,其结果与mi RNAs芯片基本一致,表明mi RNAs的结果比较可靠,可用于各类疾病中,可能参与发病的mi RNAs的初筛;4.mi R-182、mi R-29b-3p、mi R-741-3p可能参与NAFLD的发病,但其具体的影响路径及作用环节仍有待深入探寻。
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575

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