大鼠胰腺星状细胞系的建立及其介导胰腺纤维化、炎症、免疫功能的评价

发布时间：2017-12-26 22:30

  本文关键词：大鼠胰腺星状细胞系的建立及其介导胰腺纤维化、炎症、免疫功能的评价　出处：《吉林大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 胰腺星状细胞 胰腺纤维化 Toll样受体4 炎症 免疫

【摘要】：背景和目的：胰腺星状细胞（PSC）在胰腺纤维化的发病机制中起到至关重要的作用，近来的研究显示：PSC具有胰腺外分泌功能，且具有祖细胞、免疫细胞和中介细胞的功能。由于缺乏稳定的可在体外进行研究其多种功能的PSC系，PSC的广泛、深入研究受到限制。越来越多的证据表明结蛋白（desmin）作为PSC的一种特异性细胞骨架蛋白，只在部分PSC中表达。本研究的目的是建立一种desmin表达阳性的永生化大鼠PSC系，并且评价其在介导胰腺纤维化、炎症及免疫功能的作用。 方法：通过采用Rous肉瘤病毒启动子和增强子驱动SV40大T抗原在大鼠原代PSC的表达建立永生化大鼠PSC系（RP-2）。采用免疫化学方法检测细胞骨架蛋白desmin、整合素α5β1或TLR4的表达；采用Western blot方法检测desmin、Collagen I、MMP-1、MMP-2、TIMP-2以及CD14的表达。采用实时定量PCR（qRT-PCR）法检测desmin、Collagen I、IL-1和IL-6mRNA的转录水平。ELISA法检测细胞因子分泌水平。通过细胞黏附、迁移和增殖实验评价细胞功能。 结果：通过应用RSV启动子和增强子驱动SV40大T抗原的表达建立了一个稳定的永生化大鼠PSC系（RP-2）。这个细胞系已经在体外稳定培养传代超过一年，RP-2细胞保留了原代激活PSC的形态和基因表达特征，，该细胞系呈纤维母细胞样表型，且持续表达desmin。RP-2细胞可表达调节胰腺纤维化的主要基因，包括TGF-β1，PDGF，CTGF，Collagen I，FN以及参与基质重构的蛋白质: MMP-1、MMP-2或TIMP-2。在TGF-β1作用下，这种细胞的1型胶原、CTGF和TIMP-2的表达增加，而MMP-1、MMP-2的表达减少。RP-2细胞具有PSC典型的功能，包括增殖、黏附和迁移，其中对FN的黏附和迁移是通过整合素α5β1介导。TLR4和其应答基因包括促炎因子（IL-1, IL-6, TNF-α）和趋化因子（MCP-1, MIP-1α, Rantes）由RP-2细胞产生并且在LPS作用下表达增强。LPS可诱导RP-2细胞IL-1和IL-6mRNA的表达并且可被MyD88抑制剂阻断。 结论：本研究成功建立了稳定的大鼠PSC系RP-2细胞。RP-2细胞为研究PSC在胰腺纤维化、炎症和胰腺免疫发病机制方面提供了一个新的工具。
[Abstract]:Background and purpose: pancreatic stellate cells (PSC) play a crucial role in the pathogenesis of pancreatic fibrosis. Recent studies have shown that PSC has the function of pancreatic exocrine and has functions of progenitor cells, immune cells and intermediary cells. Because of the lack of stable PSC lines that can be used to study its various functions in vitro, the extensive and in-depth study of PSC is limited. More and more evidence shows that desmin is a specific cytoskeleton protein of PSC, which is only expressed in some PSC. The aim of this study is to establish an immortalized PSC rat with positive expression of desmin and evaluate its role in mediating pancreatic fibrosis, inflammation and immune function.
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R576

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 ;Roles of Smad3 and Smad7 in rat pancreatic stellate cells activated by transforming growth factor-beta 1[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年05期

2 ;The expression of toll-like receptor 2, 4 of livers in mice with systemic inflammatory response syndrome[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2006年01期

3 ;Hyaluronic acid fragments evoke Kupffer cells via TLR4 signaling pathway[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2009年02期

本文编号：1339150