肝特异性表达hNPC1L1真核表达载体的构建
本文选题：肝特异性表达 切入点：真核表达载体 出处：《基因组学与应用生物学》2017年09期 论文类型：期刊论文
【摘要】：为进一步研究NPC1L1在代谢性疾病尤其是脂代谢紊乱中具体的分子机制,本研究以pEGFP-C1质粒为模板,通过PCR扩增出Neo~r/Kan~r基因片段,并对pLiv-11质粒和PCR扩增产物进行酶切,用T4DNA连接酶连接Neo~r/Kan~r、pLiv-11和h NPC1L1基因片段,最终构建了含有表达质粒的重组菌株JM109(pLiv-11-Neo~r/Kan~r-hNPC1L1)。酶切鉴定和序列分析结果表明,构建的p Liv-11-Neo~r/Kan~r-hNPC1L1重组质粒含有hNPC1L1(human Niemann-Pick C1 like 1)基因且基因序列和开放阅读框架均正确。本研究成功构建了肝特异性表达hNPC1L1的真核表达载体,为培育h NPC1L1表达转基因巴马小型猪奠定了一定基础,有利于阐释NPC1L1的调控机制以及揭示肝脂肪代谢相关疾病的发病机制。
[Abstract]:In order to further study the molecular mechanism of NPC1L1 in metabolic diseases, especially lipid metabolic disorders, the Neo~r/Kan~r gene fragment was amplified by PCR using pEGFP-C1 plasmid as template, and the pLiv-11 plasmid and PCR amplification product were digested by enzyme digestion. The recombinant strain JM109 pLiv-11-NeohNPC1L1 was constructed by using T4 DNA ligase to link Neohrr / KanrnrLiv-11 and hNPC1L1 gene fragments. The results of restriction endonuclease digestion and sequence analysis showed that the recombinant strain JM109pLiv-11-Neor-Kanr-hNPC1L1L1 was constructed. The constructed recombinant plasmid of p Liv-11-Neo~r/Kan~r-hNPC1L1 contains hNPC1L1(human Niemann-Pick C1 like 1) gene, and the gene sequence and open reading frame are correct. In this study, the eukaryotic expression vector for liver specific expression of hNPC1L1 was successfully constructed. It is helpful to explain the regulation mechanism of NPC1L1 and to reveal the pathogenesis of liver fat metabolism related diseases.
【作者单位】： 吉林化工学院生物与食品工程学院;韶关学院英东生命科学院粤北生猪生产及疫病防控协同创新发展中心;吉林农业大学动物科学技术学院;吉林大学动物医学学院;
【基金】：国家科技支撑计划(2011BA115B02)资助
【分类号】：Q78;R575
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，本文编号：1559947
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