HBx调控microRNA221-ERα致HepG2细胞增殖的机制研究

发布时间：2018-03-13 10:34

  本文选题：乙型肝炎病毒X蛋白　切入点：miR-221　出处：《重庆医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发生发展过程中发挥重要的作用。更重要的是，microRNA221(miR-221)过表达可促进肝癌的形成，在肝癌的发生发展中发挥重要作用。此外乳腺癌中研究发现，miR-221可在转录后水平下调雌激素受体α(Estrogen Receptor α, ERα)的表达，而在肝癌中，ERα对HCC的发生发展具有保护作用。但是我们对于miR-221及ERα在HBV相关性肝癌发生发展中的作用尚不清楚。因此，本研究旨在探讨miR-221在HBV感染相关性HCC中的促癌功能以及HBx蛋白诱导miR-221上调促进HepG2细胞异常增殖的分子机制，为HBV相关性肝癌的靶向治疗提供理论指导。 方法：通过Adeasy系统构建HBx和GFP重组腺病毒载体，HBx腺病毒感染HepG2细胞后，流式细胞术、Western blot、real-time PCR检测HBx腺病毒对细胞周期、ERα及miR-221的调控作用。Western blot检测HBV阳性细胞及肝癌组织中ERα的表达情况。miR-221mimic和miR-221inhibitor分别转染HepG2细胞48h后，流式细胞术检测细胞周期变化，Western blot检测ERα表达情况。 结果：HBx腺病毒感染HepG2细胞后，可促进HepG2细胞由G1期向S期进展，，此外，HBx腺病毒可下调ERα蛋白、上调miR-221。MiR-221mimic可促进HepG2细胞增殖，下调ERα蛋白的表达，而miR-221inhibitor则抑制细胞增殖并上调ERα蛋白的表达。 结论：HBx可能通过上调miR-221进而下调ERα对肝癌的保护性效应而促进肝癌细胞异常增殖，靶向miR-221的策略具有抑制肝癌细胞增殖的治疗潜能。
[Abstract]:Objective: hepatitis B virus X protein plays an important role in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma (HCC), and the overexpression of microRNA221miR-221) can promote the formation of hepatocellular carcinoma. In addition, the expression of estrogen receptor 伪 -strogen Receptor 伪 (ER 伪) was down-regulated at post-transcriptional level in breast cancer. However, the role of miR-221 and ER 伪 in the occurrence and development of HBV associated hepatocellular carcinoma is not clear. The purpose of this study was to investigate the carcinogenic function of miR-221 in HBV infective associated HCC and the molecular mechanism of miR-221 up-regulation induced by HBx protein to promote the abnormal proliferation of HepG2 cells, and to provide theoretical guidance for the targeted therapy of HBV associated hepatocellular carcinoma. Methods: HBx and GFP recombinant adenovirus vectors were constructed by Adeasy system and infected with HepG2 cells. The regulation of HBx adenovirus on ER 伪 and miR-221 was detected by flow cytometry. Western blot was used to detect the expression of ER 伪 in HBV positive cells and hepatocellular carcinoma tissues. MiR-221 mimic and miR-221inhibitor were transfected into HepG2 cells for 48 h, respectively. Cell cycle changes were detected by flow cytometry and ER 伪 expression was detected by Western blot. Results after infection with HepG2 cell line, HepG2 cells were infected with 10% HBX adenovirus, which could promote the progression of HepG2 cells from G1 phase to S phase. In addition, adenovirus could down-regulate ER 伪 protein, up-regulate HepG2 cell proliferation and down-regulate ER 伪 protein expression. MiR-221inhibitor inhibited cell proliferation and up-regulated the expression of ER 伪 protein. Conclusion the strategy of targeting miR-221 may promote the abnormal proliferation of hepatoma cells by up-regulating miR-221 and down-regulating the protective effect of ER 伪 on HCC. The strategy of targeting miR-221 has the therapeutic potential of inhibiting the proliferation of HCC cells.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R512.62

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本文编号：1606010