CTLA-4单克隆抗体对小鼠结肠炎Th17及Treg免疫应答的影响
本文选题：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4 切入点：葡聚糖硫酸钠 出处：《武汉大学》2014年博士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的：研究CTLA-4单克隆抗体是否影响葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性结肠炎,同时从Th17和Treg细胞的角度探讨阻断CTLA-4影响肠炎的机制。 方法：采用3%葡聚糖硫酸钠(分子量36000-50000)给予6至8周雄性C57BL/6小鼠7日自由饮用,构建小鼠结肠炎模型,并通过测定肠粘膜抽提mRNA相对表达和免疫组化方法研究该模型结肠粘膜组织Th17和Treg相关的炎症细胞因子的改变情况。再将喂饲3%葡聚糖硫酸钠诱导的急性结肠炎小鼠分为两组,干预组每日腹腔注射CTLA-4单克隆抗体200ug,对照组腹腔注射同批次该抗体的同型对照IgG200ug。通过疾病活动指数、结肠炎症大体评分、组织学评分和肠组织髓过氧化物酶活性测定判断阻断CTLA-4对肠炎程度是否有改变。通过流式细胞术检测肠系膜淋巴结Th17和Treg细胞比例的改变情况。通过荧光定量法和western blot分别在mRNA和蛋白水平检测Th17和Treg相关炎症细胞因子的表达改变情况,并利用免疫组化方法观察IL-17A和STAT-3在结肠组织的表达情况。 结果：3%葡聚糖硫酸钠喂饲C57BL/6小鼠7天可成功构建小鼠急性结肠炎模型,造模结束时其疾病活动指数、结肠大体评分、组织学评分和肠组织髓过氧化物酶活性均显著高于正常对照组小鼠(p0.05),同时模型组结肠粘膜TNF-α IL-17A、 RORγt、 Foxp3和STAT-3表达均增高(p0.05),而TGF-β表达降低(p0.05)。腹腔注射CTLA-4单克隆抗体可减轻3%葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎症,造模结束时疾病活动指数、结肠大体评分、组织学评分和肠组织髓过氧化物酶活性均低于注射IgG的对照组小鼠(p0.05)。此外,与IgG对照组相比,单抗干预组肠系膜淋巴结Th17比例降低,而Treg t匕例增高(p0.05)；肠粘膜TNF-α IL-17A、 RORyt mRNA相对表达降低(p0.05),而TGF-β Foxp3和STAT-3表达增高(p0.05)。肠粘膜JAK-2、 RORγt和IL-17A蛋白表达降低(p0.05),而Foxp3、 STAT-3、 p-STAT-3表达增高(p0.05)。 结论：3%葡聚糖硫酸钠给予C57BL/6小鼠自由饮用7日可成功构建急性结肠炎小鼠模型。腹腔注射CTLA-4单克隆抗体可减轻该模型肠炎程度并改变Thl7-Treg细胞平衡,导致肠炎小鼠体内Th17应答降低,Treg应答提高。CTLA-4单克隆抗体可作为潜在治疗结肠炎的药物。
[Abstract]:Aim: to investigate whether CTLA-4 monoclonal antibody affects acute colitis induced by sodium dextran sulfate in mice, and to explore the mechanism of blocking CTLA-4 from the point of view of Th17 and Treg cells. Methods: 3% sodium dextran sulfate (molecular weight 36000-50000) was given to male C57BL / 6 mice for 6 to 8 weeks in 7th to establish colitis model. The changes of inflammatory cytokines related to Th17 and Treg in colonic mucosa of the model were studied by measuring the relative expression of mRNA and immunohistochemical method. The mice fed with sodium dextran sulfate 3% were divided into two groups. The intervention group was intraperitoneally injected with CTLA-4 monoclonal antibody 200ugg daily, while the control group was intraperitoneally injected with the same type of CTLA-4 antibody. The gross score of colitis was measured by disease activity index. Histological score and myeloperoxidase activity of intestinal tissue were used to determine whether blocking CTLA-4 changed the degree of enteritis. Flow cytometry was used to detect the change of Th17 and Treg cell ratio in mesenteric lymph nodes. Fluorescence quantitative method was used to detect the change of the ratio of Th17 and Treg cells in mesenteric lymph nodes. And western blot to detect the expression of Th17 and Treg related inflammatory cytokines at the mRNA and protein levels, respectively. The expression of IL-17A and STAT-3 in colon tissue was observed by immunohistochemical method. Results the acute colitis model was successfully established in C57BL / 6 mice fed with 3% sodium dextran sulfate for 7 days. The disease activity index and colonic gross score were measured at the end of the model. Histological score and myeloperoxidase activity in intestinal tissue were significantly higher than those in normal control mice, and the expressions of TNF- 伪 IL-17A, ROR 纬 t, Foxp3 and STAT-3 in colonic mucosa of model group were significantly higher than those in control group, while the expression of TGF- 尾 was lower than that of control group (P 0.05). Intraperitoneal injection of CTLA-4 monoclonal antibody could decrease the expression of TNF- 伪 IL-17A, ROR 纬 t, Foxp3 and STAT-3. Light 3% sodium dextran sulfate induced colitis in mice, The disease activity index, colonic gross score, histological score and intestinal myeloperoxidase activity at the end of the model were lower than those in the control group (P 0.05). In addition, compared with the IgG control group, the ratio of mesenteric lymph node Th17 in the monoclonal antibody intervention group was lower than that in the IgG control group. The expression of TNF- 伪 IL-17A, RORyt mRNA in intestinal mucosa decreased p0.05A, while the expression of TGF- 尾 Foxp3 and STAT-3 increased. The expression of JAK-2, ROR 纬 t and IL-17A in intestinal mucosa decreased p0.05, while Foxp3, STAT-3 and p-STAT-3 increased. Conclusion the mouse model of acute colitis can be successfully established by giving sodium dextran sulfate 3% to C57BL / 6 mice for free drinking on 7th. Intraperitoneal injection of CTLA-4 monoclonal antibody can reduce the degree of enteritis and change the balance of Thl7-Treg cells in the model. The Th17 response in mice with colitis was decreased and the response of Treg was increased. CTLA-4 monoclonal antibody could be used as a potential therapy for colitis.
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R574.62
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 段薇,张健,郑剑玲,苏丹,王美慧;抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的研制[J];微生物学杂志;2004年05期
2 张唯敏;;新单克隆抗体已应用于临床[J];国外医学(肿瘤学分册);1986年04期
3 迟素敏;;单克隆抗体的制备和鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;1986年Z1期
4 张明杰;单克隆抗体在农业中有何用途?[J];细胞与分子免疫学杂志;1991年02期
5 孙国凤;;单克隆抗体药品在日本通过调查会[J];生物技术通报;1991年09期
6 ;一种制备单克隆抗体的更有效而经济的方法[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);1998年05期
7 任新玲,沈丽英,金伯泉,井晓梅,王睿;表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究[J];第四军医大学学报;2000年03期
8 章波,陈惠鹏,范国才,陈吉中,王清明;抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制[J];免疫学杂志;2000年06期
9 李凤英,陈名道,顾卫琼,陈春荣,唐金凤;人瘦素单克隆抗体的鉴定[J];放射免疫学杂志;2000年02期
10 陈志南,蒋建利;单克隆抗体——从鼠到人[J];国外医学(免疫学分册);2000年03期
相关会议论文 前10条
1 徐爽;安万新;胡荣花;叶萍;孟祥昱;;不同方法收集单克隆抗体浓缩后的比较[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年
2 刘大维;高斌;;狂犬病毒单克隆抗体的研制[A];2010年中国科学院微生物研究所博士后学术年会暨第二届博谊论坛论文摘要集[C];2011年
3 陈炅;;治疗性单克隆抗体的作用靶点及临床应用[A];2013年中国临床药学学术年会暨第九届临床药师论坛论文集[C];2013年
4 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年
5 彭虹;舒翠丽;刘永全;王华;高杰英;;抗人α4单克隆抗体的制备和鉴定[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
6 祭芳;史建荣;陈正贤;徐剑宏;陆琼娴;;抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
7 张光波;董秋明;於葛华;李文香;张学光;;一株鼠抗人4-1BB单克隆抗体的研制及其生物学功能的鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
8 张锦超;杨金菊;吴琼;李戬;陈勇;李辉;宋颖博;罗晓彤;任飞;高媛;杜雪梅;鞠艳芳;王兆卿;王京兰;徐菡;柳晓兰;崔玉芳;钱小红;贺福初;高建恩;孙启鸿;;高效鉴定单克隆抗体所识别未知抗原技术平台的建立及应用[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年
9 杨永昌;王北宁;赖春宁;黎燕;;抗血小板单克隆抗体重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
10 孙效;高新;尚明美;宋海峰;汤仲明;;抗胰高血糖素样肽单克隆抗体的制备[A];第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要[C];2006年
相关重要报纸文章 前10条
1 记者 尹晖;单克隆抗体研发进入新阶段[N];无锡日报;2010年
2 编译 李勇;单克隆抗体：生物类似药开发的秘钥[N];医药经济报;2014年
3 广凯;单克隆抗体药物将有大发展[N];中国医药报;2000年
4 ;单克隆抗体应用前景看好[N];中国医药报;2002年
5 黄东临;罗氏叱咤单克隆抗体市场[N];医药经济报;2005年
6 ;单克隆抗体异军突起[N];中国高新技术产业导报;2003年
7 尹晖;全球最大单克隆抗体研制基地落户无锡[N];中国医药报;2010年
8 尹晖;最大单克隆抗体研制项目在马山奠基[N];无锡日报;2010年
9 数文;罗氏买进抗癌单克隆抗体[N];中国医药报;2008年
10 毛文波;单克隆抗体：征服癌症的新方法[N];科技日报;2004年
相关博士学位论文 前10条
1 魏德强;以植物病毒为载体建立新型的载体—半抗原免疫体系[D];东北林业大学;2014年
2 王璞;以CD146为靶点的胃癌早期诊断多功能纳米探针的相关研究[D];第三军医大学;2015年
3 张潇;抗EV71病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究[D];北京工业大学;2015年
4 程林;人△42PD1特异性单克隆抗体的制备及其免疫功能的初步探讨[D];南京大学;2014年
5 王海;直肠癌上调表达蛋白eEF2单克隆抗体制备及临床应用[D];吉林大学;2016年
6 孙佳善;禽流感、新城疫和犬瘟热病毒单克隆抗体筛选策略比较及应用研究[D];东北农业大学;2016年
7 胡新韬;HIV-1B'和CRF07_BC慢性感染者中和抗体应答特征及CD4bs抗原特异性单克隆抗体分离鉴定初步研究[D];中国疾病预防控制中心;2012年
8 黄莎;CTLA-4单克隆抗体对小鼠结肠炎Th17及Treg免疫应答的影响[D];武汉大学;2014年
9 白宇;马γ-干扰素单克隆抗体的制备及细胞免疫评价方法的研究[D];中国农业科学院;2008年
10 余自强;抗血小板胶原受体糖蛋白VI单克隆抗体的制备和功能研究[D];苏州大学;2005年
相关硕士学位论文 前10条
1 王晓磊;流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与prM-E蛋白抗原捕获ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2015年
2 葛新杰;NT-proBNP单克隆抗体的研制及ELISA定量检测方法的建立[D];郑州大学;2015年
3 张标;鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究[D];苏州大学;2015年
4 郑莹;CD123在儿童B系急性淋巴细胞性白血病中的表达与抗人CD123单克隆抗体的制备[D];苏州大学;2015年
5 董倩;JEV NS2B蛋白单克隆抗体的制备及其应用[D];华中农业大学;2015年
6 薛翼鹏;猪CR1-like单克隆抗体的制备及CR1-like在猪红细胞膜表面分布状态的研究[D];山西农业大学;2015年
7 缪欢;JEV PrM/M蛋白单克隆抗体的制备及JEV P3感染U251细胞蛋白质组学分析[D];华中农业大学;2015年
8 仲晓丽;犬副流感病毒单克隆抗体的制备及单链抗体蛋白的表达和活性鉴定[D];华中农业大学;2015年
9 刘静静;绵羊早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定[D];河北农业大学;2015年
10 安莲;B型流感嗜血杆菌寡糖缀合物疫苗的免疫活性研究相关单克隆抗体的制备[D];山东大学;2015年
，本文编号：1618900
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/1618900.html
