肝星状细胞恢复期和活化期差异蛋白质组研究

发布时间：2018-04-04 22:04

  本文选题：肝星状细胞　切入点：SILAC　出处：《清华大学》2014年博士论文

【摘要】：肝星状细胞(HSCs)是肝纤维化效应细胞(肌成纤维细胞，MFs)的主要来源。临床和实验研究发现肝纤维化的逆转和恢复伴随着活化HSCs的清除。已知的四种清除方式中，细胞凋亡、免疫清除和衰老主要是减少活化HSCs的数目，而表型逆转可以促使活化的HSCs恢复非活化状态甚至静止表型。理解肝星状细胞在损伤中的转化机制能够为阐明肝纤维化机制和治疗肝纤维化提供依据。 本研究为了深入了解活化HSCs表型逆转的分子机制，通过SILAC结合LTQ-FT技术分别检测了人肝星状细胞活化期和恢复期这两种细胞状态之间的细胞差异蛋白和分泌差异蛋白。利用MaxQuant软件定量分析分别得到1347个定量细胞蛋白和784个定量分泌蛋白，其中，恢复期细胞与活化期细胞相比，在细胞蛋白质组中鉴定到212个上调(差异值RatioL/H≥1.5)和61个下调蛋白(差异值RatioL/H≤0.67)；在分泌蛋白质组共鉴定到109上调蛋白(差异值RatioL/H≥1.5)和221个下调蛋白(差异值RatioL/H≤0.67)。生物信息学分析差异蛋白发现，与活化组比较，恢复组在细胞水平的上调差异蛋白功能变化主要集中在了氧化-还原反应和脂类代谢等方面，在分泌水平的上调蛋白功能变化主要体现在氨基酸代谢和糖类代谢等途径，无论细胞水平还是分泌水平，下调蛋白生物功能首先体现在细胞骨架重塑方面。部分差异蛋白(STAT1、FLNA、LASP1、NAMPT、LAMB1和UBE4B等)经免疫印记、免疫组化和免疫荧光等技术在LX-2细胞模型、体外分离培养的HSCs细胞模型、CCl4肝纤维化模型的肝组织和临床血清标本验证，证实是潜在的肝纤维化相关诊断标志物，为进一步的规模化临床验证奠定了基础。另外，我们通过siRNA干扰和特异抑制剂的干预，，针对转录因子STAT1在HSCs中的作用做了进一步验证，表明STAT1是肝纤维化恢复的关键调节因子。 本研究利用SILAC体内标记结合LTQ-FT质谱技术探究HSCs的恢复期和活化期细胞蛋白质组和分泌蛋白质组的定量差异，发现了恢复组特异的生物功能和信号途径，实现潜在肝纤维化标志蛋白的高通量发掘，并初步验证了肝纤维化临床诊断的候选标志物，发掘抗纤维化药物有效作用靶点，从而为肝纤维化的诊断、治疗和预后判断提供指标。
[Abstract]:Hepatic stellate cell (HSCs) is the main source of hepatic fibrosis effector cells (MFs).Clinical and experimental studies have found that the reversal and recovery of hepatic fibrosis is accompanied by the clearance of activated HSCs.Among the four known scavenging methods, apoptosis, immune clearance and senescence are mainly to reduce the number of activated HSCs, while phenotypic reversal can induce activated HSCs to return to non-activated state or even static phenotype.Understanding the transformation mechanism of hepatic stellate cells in injury can provide evidence for elucidating the mechanism of hepatic fibrosis and treating hepatic fibrosis.In order to understand the molecular mechanism of phenotypic reversal of activated HSCs, the cellular differential proteins and secretory differential proteins of human hepatic stellate cells were detected by SILAC and LTQ-FT.1347 quantitative cellular proteins and 784 quantitative secretory proteins were obtained by MaxQuant software.鍦ㄧ粏鑳炶泲鐧借川缁勪腑閴村畾鍒

本文编号：1711880