TLR3与TLR9激动剂对乙肝疫苗免疫效果影响的实验研究

发布时间：2018-04-08 22:22

  本文选题：Toll样受体3　切入点：Toll样受体9　出处：《山西医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的： 1.探讨在乙肝疫苗中单独或联合应用TLR3与TLR9激动剂对小鼠体液免疫水平、mDC活化和细胞因子分泌的影响。 2.探讨TLR3与TLR9激动剂单独或联和应用作为乙肝疫苗佐剂的可行性。 方法： 将50只周龄为6~7周的BALB/c雌性小鼠随机分为5组，分别为：①空白对照组；②HepB组；③HepB+Poly(I:C)组；④HepB+CpG ODN组；⑤HepB+Poly(I:C)+CpG ODN组；各组小鼠分别于实验开始后第0、4周左胫前肌注射疫苗和相应激动剂，第6周采集非抗凝血和抗凝血，处死小鼠并摘取脾脏。采用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked ImmunosorbentAssay, ELISA)检测小鼠血清中抗-HBs浓度，采用流式细胞术(Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS)检测全血中B细胞和mDC的比例，采用ELISA法检测脾脏组织匀浆上清液中IL-2、6、10、12的浓度。 结果： 1.各组小鼠完成全程免疫后使用ELISA检测小鼠血清抗-HBs浓度，结果显示：与空白对照组相比，其他各组小鼠血清抗-HBs浓度均显著增高(P0.05)。与HepB组相比，TLR3与TLR9激动剂单独或联合使用组小鼠血清抗-HBs浓度均有不同程度升高，其中单独使用TLR9激动剂的小鼠血清抗-HBs浓度最高，但差异均无统计学意义(P0.05)。 进一步检测小鼠全血中B细胞含量，结果显示：使用TLR9激动剂的小鼠全血中B细胞含量显著高于空白对照组和HepB组，且差异有统计学意义(P0.05)。联合使用TLR3与TLR9激动剂的小鼠其B细胞含量低于其他各组，，且差异有统计学意义(P0.05)。其他组间小鼠全血B细胞含量差异无统计学意义(P0.05)。 2.检测小鼠全血中mDC含量，结果显示：与空白对照组相比，HepB组小鼠全血mDC含量显著升高，差异有统计学意义(P0.05)。单独使用TLR3或TLR9激动剂的小鼠全血mDC含量高于空白组，低于HepB组，但差异均无统计学意义(P0.05)。TLR3与TLR9激动剂联合使用组小鼠全血mDC含量低于HepB组，差异存在统计学意义(P0.05)。 3. ELISA法检测小鼠脾脏组织液中细胞因子浓度，Th1型细胞因子检测结果显示各组间小鼠脾脏组织液IL-2浓度总体上存在统计学差异(F=5.717,P0.05)。其中，HepB组小鼠脾脏组织液IL-2浓度低于空白对照组，但差异无统计学意义(P0.05)。单独使用TLR3或TLR9激动剂组小鼠脾脏组织液IL-2浓度高于空白对照组和HepB组，但差异无统计学意义(P0.05)。联合使用TLR3与TLR9激动剂的小鼠脾脏组织液IL-2浓度显著高于空白对照组和HepB组，差异存在统计学意义(P0.05)。IL-12浓度测量结果显示，单独或联合使用TLR9激动剂组小鼠脾脏组织液中IL-12浓度均低于空白对照组和HepB组，但差异均无统计学意义(P0.05)。 Th2型细胞因子浓度检测结果显示，各组间小鼠脾脏组织液IL-6浓度总体上存在统计学差异(F=5.355, P0.05)。其中，联合使用TLR3与TLR9激动剂的小鼠IL-6浓度显著低于空白对照组和HepB组(P0.05)。其他各组间差异均无统计学意义(P0.05)。IL-10浓度测量结果显示，单独或联合使用TLR3与TLR9激动剂的小鼠脾脏组织液IL-10浓度低于空白对照组和HepB组，但差异无统计学意义(P0.05)。 结论 1.接种乙肝疫苗后小鼠血清抗-HBs浓度显著升高。单独或联合使用TLR3与TLR9激动剂可不同程度提高抗-HBs分泌水平，其中TLR9激动剂的效果最强。此外，使用TLR9激动剂能够显著提高全血中B细胞含量，提示其可能通过抑制B细胞凋亡来提高体液免疫应答水平，刺激机体持续分泌抗体。由此推测TLR9激动剂可能是乙肝疫苗良好的潜在佐剂。 2.接种乙肝疫苗可显著提升小鼠全血细胞中mDC比例，促进小鼠对HBsAg的识别与提呈。TLR3与TLR9激动剂单独应用后小鼠mDC比例未见显著改变，TLR3与TLR9激动剂联合应用后mDC比例显著下降，其机制有待进一步研究。 3.联合使用TLR3与TLR9激动剂可显著增强小鼠脾脏组织分泌IL-2的能力，同时抑制其IL-6的分泌，提示TLR3与TLR9激动剂联合应用可在一定程度上改善乙肝疫苗中铝佐剂诱导的Th2型免疫应答偏倚。
[Abstract]:Objective:
1. to investigate the effects of TLR3 and TLR9 agonists on the level of humoral immunity, mDC activation and cytokine secretion in HBV vaccine.
2. the feasibility of TLR3 and TLR9 agonists alone or in combination as a hepatitis B vaccine adjuvant is explored.
Method锛

本文编号：1723618