血清miRNA表达谱用于隐匿性乙型肝炎诊断的研究

  本文关键词：血清miRNA表达谱用于隐匿性乙型肝炎诊断的研究，由笔耕文化传播整理发布。

血清miRNA表达谱用于隐匿性乙型肝炎诊断的研究

时间:13-06-20

 【摘要】 目的乙肝表面抗原(HBsAg)血清学检测的大范围推广,在很大程度上提高了输血的安全性,但这并不能完全杜绝HBV经输血途径的传播,在一些特殊的情况下, HBsAg阴性的血液也能造成HBV的传播,如在急性感染中的血清清除期,或者献血者患有隐匿性乙型肝炎感染(OBI)。OBI具有血清中检测不到HBsAg但有低水平病毒复制活动的特点,因而成为威胁输血安全和器官移植安全的一大隐患。本课题的目的是验证一个设想,即OBI患者血清中存在特异性的miRNA表达谱,而这种表达谱可以用作检测OBI感染的诊断标志物。方法由于OBI患者的血清样本很难获得,因此,我们首先研究了慢性乙型肝炎患者血清中特异性的miRNA表达谱。我们首先用Solexa测序技术分别对30例慢性乙肝患者和30例正常对照的混合血清中全部miRNA进行了初筛,然后用qRT-PCR技术对初筛中差异表达的miRNA进行验证。以这种方法,我们发现了13个HBV特异性的血清miRNA。最后,我们利用基于Taqman探针的qRT-PCR技术检测了这13个miRNA在OBI患者血清中的表达水平。结果我们在30例正常对照、29例慢性乙肝患者和11例OBI患者的血清中检测了13个HBV特异性miRNA的表达情况,我们发现了4个miRNA(1et-7c,miR-23b,miR-122和miR-150)在OBI患者血清中的表达量显著高于正常对照中。这组4个miRNA的表达谱能够精确地把OBI患者(AUC=0.999)和慢性乙肝患者(AUC=0.989)与正常对照区分开来。聚类分析的结果也表明这4个]miRNA可用于区分OBI患者和正常对照。标志物,且具有很高的灵敏性和特异性。 

【关键词】 隐匿性乙型肝炎； 慢性乙型肝炎； 血清miRNA表达谱； 生物标志物； Solexa测序技术； 实时定量PCR技术； 

摘要 4-6

Abstract 6-7

缩略词表 8-9

目录 9-11

第1章 研究背景综述 11-25

    1.1 miRNA研究进展概述 11-22

        1.1.1 miRNA的发现历程 11-12

        1.1.2 miRNA的结构特征 12-13

        1.1.3 miRNA的加工成熟过程 13-14

        1.1.4 miRNA的作用方式 14-16

        1.1.5 miRNA的生物学意义及其与癌症的关系 16-22

    1.2 肝脏相关miRNA研究进展概述 22-25

        1.2.1 miRNA与肝脏的发育与功能 22-23

        1.2.2 miRNA与肝炎 23-24

        1.2.3 miRNA与肝癌 24-25

第2章 慢性乙型肝炎患者血清miRNA的Solexa测序 25-32

    2.1 前言 25-26

    2.2 材料与方法 26-28

        2.2.1 研究对象 26

        2.2.2 相关仪器与试剂 26-27

        2.2.3 实验方法 27-28

    2.3 实验结果与分析 28-30

    2.4 讨论 30-32

第3章 慢性乙型肝炎特异性miRNA表达谱的验证 32-40

    3.1 前言 32

    3.2 材料与方法 32-36

        3.2.1 研究对象 32

        3.2.2 相关仪器与试剂 32-34

        3.2.3 实验方法 34-36

    3.3 实验结果与分析 36-37

        3.3.1 Training Set 36-37

        3.3.2 Validation Set 37

    3.4 讨论 37-40

第4章 隐匿性乙型肝炎特异性miRNA表达谱的研究 40-49

    4.1 前言 40-41

    4.2 材料与方法 41-43

        4.2.1 研究对象 41-42

        4.2.2 相关仪器与试剂 42

        4.2.3 实验方法 42-43

    4.3 实验结果与分析 43-47

    4.4 讨论 47-49

结论 49-50

参考文献 50-58

论文发表情况 58-59

致谢 59-61

附录 61

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