HBx对HepG2细胞脂代谢的影响及可能的机制

发布时间：2016-11-14 08:08

  本文关键词：HBx对HepG2细胞脂代谢的影响及可能的机制，由笔耕文化传播整理发布。

《重庆医科大学》 2012年

HBx对HepG2细胞脂代谢的影响及可能的机制

陈娟  

【摘要】：研究背景 据最新数据显示[1]，我国约有9.3百万人为慢性乙肝病毒感染者，HBV感染及其导致的各种疾病，是我国所面临的一个严重的公共卫生问题。最近，有报道在CHB和CHC患者中，肝脂肪变性与肝纤维化程度独立相关[2]，后者与肝硬化和肝癌的发生密切相关。在HBV感染中肝脂肪变发生率为27%-51%[3-4]，但有关HBV与肝脂肪变关系及其相关分子机制，国内外研究很少，尚未达成共识。脂肪肝是病毒感染、饮食等多种因素综合作用引起的肝脏病变，即脂肪在肝细胞内的过多堆积。近年，随着人民生活水平越来越高，国民生活方式和膳食模式发生了相当大的变化，膳食中高脂饮食所占比例呈上升趋势，同时脂肪肝的发生率也逐年上升。所以，HBV、高脂环境与肝脂肪变性的关系的研究具有重要意义。晚近有文献[5]报道HBx可能在HBV相关的肝细胞脂肪变发生发展中起重要作用，但另有研究者[6]有与此不同的观点。因此，HBV是否通过HBx参与肝细胞脂肪变性的发生？其可能的分子机制是否与LXRα、SREBP-1、FAS等调节脂代谢的重要基因有关？HBV、高脂环境和肝脂肪变性之间的关系如何？针对以上问题，本研究拟建立表达HBx的HepG2/HBx细胞模型，首先观察HBx对HepG2细胞脂代谢相关基因表达的影响；在此基础上进一步研究油酸钠处理HepG2/HBx细胞与HepG2细胞后，两细胞内脂质沉积的差异，探讨HBx在肝细胞脂代谢中的作用及可能的分子机制。本研究分以下两部分。 第一部分HBx对HepG2细胞脂代谢相关基因表达的影响 目的 建立表达HBx的HepG2/HBx细胞模型，，探讨HBx对脂代谢相关基因表达的影响。 方法 1．将质粒pIRES2-eGFP-HBx转染入HepG2中，建立表达HBx的HepG2/HBx细胞模型(HepG2/HBx组)；以转染空载体pIRES2-eGFP(HepG2/pIRES2组)及未转染（HepG2组）的HepG2细胞作对照。 2．转染后24h、48h、72h，荧光显微镜观察GFP的表达；检测细胞内TG含量；RT-PCR方法检测SREBP-1, LXRα mRNA表达水平；Western blot检测HBx，LXRα及FAS蛋白表达变化。 结果 1．在转染后24h、48h、72h, HepG2/HBx细胞和HepG2/pIRES2细胞中有GFP的表达并随时间延长而增多、增强，仅在HepG2/HBx细胞内有HBx表达，并且随转染时间的延长而逐渐增加（P＜0.05）。 2．在转染后24h、48h、72h, HepG2/HBx细胞内LXR、SREBP-1的mRNA表达以及LXRα、FAS蛋白表达，在各相同时间点均较对照组明显增加（P0.05/0.01），随时间的延长而逐渐增多（P0.05/0.01），且与HBx表达量均呈正相关（P＜0.05）。HepG2/HBx细胞内TG含量与对照组相比，差异尚无统计学意义（P＞0.05）。 结论 1．成功建立HepG2/HBx细胞模型。 2．HBx-LXRα-SREBP-1/FAS通路参与调节脂质代谢相关基因的转录和表达，可能是引起肝细胞脂肪变性发生的重要分子机制之一。 第二部分HBx对油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积的影响 目的 在HepG2-HBx细胞模型基础上给予油酸钠处理，探讨HBx对油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积的影响。 方法 1．将质粒pIRES2-eGFP-HBx转染入HepG2细胞中，建立表达HBx的细胞模型（HepG2-HBx）；以转染空载体pIRES2-eGFP（HepG2-pIRES2）和HepG2细胞（HepG2）作对照。转染后每8h用荧光显微镜分别观察各组细胞内GFP的表达，取转染后首次观察到GFP表达的时间点作为开始给于油酸钠处理的时间点。 2．油酸钠处理各组细胞24h、48h（分别命名为HBx/OA组、空/OA组、G2/OA组），TG含量测定及油红O染色了解细胞内脂质沉积情况；RT-PCR法检测SREBP-1和LXRα的mRNA表达水平,Western blot检测HBx、LXRα及FAS蛋白表达变化。 结果 1．油酸钠处理时间点的确定:在转染后8h各组细胞内均未观察到绿色荧光，而转染后16h观察到HepG2-HBx组和HepG2-pIRES2组细胞内有绿色荧光，故选择转染后16h作为开始给于油酸钠处理的时间点。 2．在相同油酸钠处理的条件下，HBx/OA组细胞内脂滴数量和TG含量与对照组相比均明显增加（P0.01）；给予油酸钠处理细胞24h，HBx/OA组细胞内LXRα，SREBP-1的mRNA表达量和LXRα和FAS蛋白表达量较对照组均明显增加（P0.01/0.05）。 结论 HBx通过LXRα-SREBP-1/FAS通路增加油酸钠诱导脂质在HepG2细胞沉积的作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.5
【目录】：

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