Locostatin对肝星状细胞胶原代谢的影响

发布时间：2018-04-30 23:29

  本文选题：肝星状细胞 + 胶原　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：肝星状细胞（hepatic stellate cell HSC）是ECM的主要来源，正常情况下肝星状细胞处于静止状态。HSC表现为富含维生素A脂滴的静止型，基本功能主要有：①代谢和贮存维生素A，②储存脂肪，③合成和分泌胶原及糖蛋白、蛋白多糖等基质成分，④合成基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase MMPs)及其组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloprot-einases, TIMPs)，⑤表达细胞因子及受体，⑥参与肝窦血流调节。当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时，肝星状细胞被激活，其表型由静止型转变为激活型。肝星状细胞激活后可以分泌和增生细胞外基质，通过这点参与肝纤维化的形成并重建肝内结构，此外还可以提升肝窦内的压力。当受到一些物理或化学刺激后，HSC激活并转化为肌成纤维细胞样细胞(myofibroblast cells, MFC)，各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞。 肝纤维化发生发展过程中的关键环节是肝星状细胞的持续激活，当肝星状细胞被激活后可以增生和分泌细胞外基质。肝星状细胞激活后转化为肌成纤维细胞样细胞(MFC)，各种致HSC位于Disse间隙内，紧贴着肝窦内皮细胞（sinusoidal endothelial cells, SEC）和肝细胞。其形态不规则，胞体呈圆形或不规则形，常伸出数个星状胞突包绕着肝血窦。分泌出的细胞外基质会参与肝内结构的重建并且促进肝纤维化的形成。肝星状细胞的激活过程十分复杂，包括两个主要阶段：启动阶段及持续阶段。此外，肝星状细胞激活后可以使肝窦内压升高也是肝纤维化的病理基础。持续阶段则是这些刺激因素维持肝星状细胞的活化表型，结果引起肝纤维化形成。 胶原是细胞外基质的主要成份，在发生肝纤维化时人体内胶原比正常时增加5-7倍，其中以I、III型增加为主，I型胶原较III型胶原增加明显，含量达60%-70%。激活的肝星状细胞能表达出成纤维细胞的特征，其胞质中维生素A减少甚至缺乏，细胞收缩生成胶原纤维。细胞核内胶原相关遗传信息经转录、翻译、修饰后形成a肽链，每三条a肽链相互结合拧成三条螺旋状结构，成为前胶原，前胶原在细胞内合成后被分泌到细胞外间隙形成不溶性胶原。胶原降解主要由胶原酶参与降解，它能在生理PH和温度条件下特异性水解天然胶原蛋白三维螺旋结构，而不损伤其他蛋白质和组织。 Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein, RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族(phosphatidylethanolalmine-binding proteins, PEBPs)的成员之一，广泛存在于不同种属，参与多种信号转导通路的调节。RKIP是在信号通路Raf-1/MEK/ERK1,2中起负向调节作用的因子，但是RKIP过表达可以增强HSC的迁移能力Locostatin是一种无抗菌作用的黄恶唑酮衍生物，是RKIP的特异性抑制剂，可以显著抑制HSC的迁移。可以选用肝星状细胞株LX-2，研究TGF-β1刺激后Locostatin对HSC胶原代谢酶MMPs和TIMPs分泌的影响，以评估Locostatin在肝纤维化治疗中是否具有应用的可能。 目的：研究TGF-β1刺激后Locostatin对HSC胶原代谢酶MMPs和TIMPs分泌的影响，将就Locostatin是否可以促进肝纤维化的逆转进行研究。 方法：通过聚合酶链式反应（PCR）分析Type I collagen、Type IIIcollagen、Type IV collagen、MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2、MMP-7及GAPDH DNA的表达。运用酶联免疫法（ELISA）分析Type I collagen、MMP-1、TIMP-1。通过western blot方法分析Type I collagen、MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2、MMP-7、MMP-9及GAPDH蛋白的表达 结果：(1) western blot检测I型胶原蛋白的表达情况，与control组相比，Locostatin组I型胶原蛋白的表达减少(1.377±0.032vs1.252±0.007)，P0.05，与control组相比，TGF-β1组及TGF-β1+Locostatin组均无差异。western blot检测，与control组相比，MMP-1、TIMP-1在TGF-β1、TGF-β1+Locostatin、Locostatin组表达明显增加。各组MMP-1/TIMP-1蛋白表达与control组相比无明显差异。western blot检测：与control组相比，TGF-β1组MMP-2蛋白的表达明显增加(1.102±0.002vs1.123±0.002)，，P0.05；与control组相比，TGF-β1、TGF-β1+Locostatin、locostatin组TIMP-2蛋白的表达明显增加。TGF-β1+Locostatin MMP-2/TIMP-2与control组相比，蛋白的表达明显降低(1.135±0.002vs1.101±0.004)，P0.05；western blot检测：与control组相比，TGF-β1、TGF-β1+locostatin组MMP-7蛋白的表达明显减少。western blot检测：与control组相比，TGF-β1、TGF-β1+locostatin、locostatin组MMP-9蛋白的表达明显减少。（2）RT-PCR结果显示：Locostatin组I型胶原mRNA的表达明显减少(1.000±0.015vs0.083±0.034)，P0.05；与control组相比，TGF-β1组及TGF-β1+Locostatin组均无差异。RT-PCR检测：与control组相比，TGF-β1组III、IV型胶原mRNA的表达明显增加；与control组相比，Locostatin组III、IV型胶原mRNA的表达明显减少,与control组相比，TGF-β1+Locostatin组无明显差异。RT-PCR检测，与control组相比，MMP-1、TIMP-1在TGF-β1、 TGF-β1+Locostatin、Locostatin组mRNA表达明显增加。各组MMP-1/TIMP-1表达与control组相比无明显差异。RT-PCR检测：与control组相比，TGF-β1组MMP-2mRNA的表达明显增加(0.976±0.034vs1.094±0.002)，P0.05；与control组相比，TGF-β1、TGF-β1+Locostatin、 locostatin组TIMP-2mRNA的表达明显增加。TGF-β1+Locostatin MMP-2/TIMP-2与control组相比，mRNA的表达明显降低(0.9103±0.050vs0.722±0.016)。(3)enzyme-linked immuno sorbent assay结果显示，Locostatin组I型胶原的表达减少(0.148±0.006vs0.111±0.058)，P0.05，与control组相比，TGF-β1组及TGF-β1+Locostatin组均无差异。与control组相比，MMP-1、TIMP-1在TGF-β1、 TGF-β1+Locostatin、Locostatin组表达明显增加。各组MMP-1/TIMP-1蛋白表达与control组相比无明显差异。 结论：locostatin减少了肝星状细胞I型胶原、III型胶原、IV型胶原的表达，可能与MMP-1的增加有关。
[Abstract]:The hepatic stellate cells ( HSC ) are the main sources of ECM . In normal cases , hepatic stellate cells are stationary . The basic functions of HSC are : 鈶

本文编号：1826726