脂多糖对人正常肝内胆管上皮细胞TLR4

发布时间：2016-11-23 08:30

  本文关键词：脂多糖对人正常肝内胆管上皮细胞TLR4-NF-κB通路的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

《安徽医科大学》 2015年

脂多糖对人正常肝内胆管上皮细胞TLR4-NF-κB通路的影响

韩珑  

【摘要】：目的探讨不同浓度炎症刺激物脂多糖(LPS)作用相同时间及同一浓度LPS作用不同时间对人正常肝内胆管上皮细胞(Hi BEC)中TLR4-NF-кB通路中TLR4和NF-кB m RNA表达的影响。以期了解受感染的细胞向肿瘤方向转变的可能机制。方法体外培养人肝内胆管上皮细胞(HIBEC)至4-6代后,分成三组实验:A组分成六小组,其中一组为正常对照组不加LPS,其余五组加入同一浓度LPS(4 ug/ml)但作用不同时间(分别为3,6,9,12,24h);B组分成六小组,其中一组为正常对照组不加LPS,其余五组分别加入不同浓度的LPS(依次为0.1,1,4,8,10ug/ml)但作用相同时间(6h)。分别收集各组细胞,使用Realtime RT-PCR分析两组细胞中TLR4m RNA和NF-κB m RNA的表达水平。C组:分成两小组,分别为正常对照组不加LPS,另一组为使用4ug/ml的LPS,作用6h,使用Western blot检测各小组TLR4、NF-κB蛋白表达水平。各组结果均使用SPSS16.0统计软件对数据进行分析,所有实验数据以?x±s表示,多组间均数比较时采用方差分析(ANOVA),两两比较采用最小显著差异法(LSD法),观察两组变量间线性关系的密切程度和相关方向使用线性相关(Pearson积矩相关系数)。规定P0.05为差异在统计学上有意义。结果(1)LPS(4ug/ml)刺激Hi BEC后TLR4、NF-κB m RNA表达水平均显著增加(P0.05),表明LPS激活Hi BEC中TLR4-NF-κB通路,从而介导炎症反应。与NC组相比,TLR4、NF-κB m RNA表达量在LPS刺激6h时达高峰,为效应最强的刺激作用时间。TLR4 m RNA与NF-κB m RNA表达量之间的统计学意义上有着显著正相关(r=0.979,P0.05)。(2)在一定范围内(≤4ug/ml),随着LPS浓度的增加,Hi BEC中TLR4和NF-κB m RNA的表达水平均逐渐增加,但高浓度的LPS(≥8ug/ml),其刺激效应逐渐降低,TLR4、NF-κB m RNA的表达水平均减少,4ug/ml为效应最强的刺激浓度。TLR4 m RNA与NF-κB m RNA表达量之间的统计学意义上有着显著正相关(r=0.975,P0.05)。(3)使用效应最强的刺激浓度及刺激持续时间,即4ug/ml LPS刺激Hi BEC 6h后,从蛋白水平检测TLR4、NF-κB蛋白表达水平,与NC相比,LPS组TLR4、NF-κB蛋白表达显著增加(P0.05)。结论1.脂多糖可以激活正常人肝内胆管上皮细胞中的TLR4-NF-кB通路,且效应最强的刺激浓度及刺激持续时间为4ug/ml LPS刺激Hi BEC 6h。2.不同浓度脂多糖刺激人正常肝内胆管上皮细胞不同时间,表达TLR4 m RNA和NF-кB m RNA均有时效和量效依赖关系。3.人正常肝内胆管上皮细胞在4-6代时,细胞代谢旺盛,宜于做实验。六代以后,该细胞系逐渐走向衰老凋亡。

【关键词】：
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575
【目录】：

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