艾塞那肽对高脂诱导的L02细胞FTO表达的影响及其机制

发布时间：2018-05-18 23:46

  本文选题：胰高血糖素样肽-1 + 非酒精性脂肪肝　； 参考：《郑州大学》2014年硕士论文

【摘要】：背景 非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的，以肝脏过量脂肪积聚为特征的疾病，目前被认为是代谢综合征在肝脏的表现。胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）和氧化应激（oxidative stress）是NAFLD发病的主要病理生理基础。脂肪量和肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene，FTO)是通过全基因组关联分析发现的与肥胖密切相关的一个基因。研究显示，FTO参与体重调节并与胰岛素抵抗、糖脂代谢明显相关。郭剑津等研究发现FTO通过增加肝细胞氧化应激水平促进脂质沉积，是NAFLD形成的机制之一[1]。本课题组前期研究发现，用高脂饮食制备SD大鼠NAFLD模型时，随着造模时间的延长，大鼠肝脏中FTO的表达水平也相应升高，加重了脂质代谢紊乱。胰高血糖素样肽1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）作为一类新型治疗糖尿病的药物应用于临床时发现其具有改善胰岛素抵抗、降低体重的作用，近年来越来越多地被用于NAFLD的治疗研究中。ShaniBen-Shlomo等研究发现GLP-1可抑制肝脏脂肪生成和脂质沉积，减轻肝脏炎症反应[2]。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路是细胞内一条重要的信号传导通路，研究发现GLP-1可通过PI3K/Akt通路调节细胞的代谢与增殖凋亡。GLP-1受体激动剂艾塞那肽是否通过PI3K/Akt通路调节FTO基因的表达，进而改善脂代谢紊乱，治疗NAFLD，目前尚无这方面的文献报道。 目的 探讨胰高血糖素样肽1（GLP-1）受体激动剂艾塞那肽对高脂诱导的人正常肝细胞L02细胞脂肪变性中FTO基因表达的影响，探索GLP-1治疗非酒精性脂肪肝的机制。 方法 体外用含10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养液培养人正常肝细胞L02细胞，采用含50%FBS的RPMI1640培养液诱导L02细胞脂肪变性，实验共分为5组：①正常对照组：培养液FBS的浓度为10%；②高脂组：培养液FBS的浓度为50%；③高脂+艾塞那肽组：高脂培养液中加入浓度为10nmol/L艾塞那肽；④正常+艾塞那肽组：正常培养液中加入浓度为10nmol/L艾塞那肽；⑤高脂+艾塞那肽+PI3K抑制剂组：高脂培养液中加入浓度为10nmol/L的艾塞那肽和浓度为50umol/L的PI3K抑制剂LY294002。各组分别干预48h，应用全自动生化仪检测细胞内甘油三酯（Triglyceride，TG）的含量及上清中丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AspartateAminotransferase, AST)、乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)、碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)的水平，油红“O”染色测定细胞内脂滴情况，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测FTO mRNA的表达水平，Western blotting检测FTO蛋白的表达情况。 结果 1．艾塞那肽对正常L02细胞的TG、ALT、AST、LDH、ALP水平、FTO mRNA和蛋白表达无明显影响（P＞0.05）。 2．与正常对照组比较，高脂组细胞内脂滴明显增多，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平升高，FTO mRNA和蛋白表达均增高，差异均有显著性（P＜0.01）。 3．与高脂组比较，高脂+艾塞那肽组细胞内脂滴明显减少，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平下降，FTOmRNA和蛋白表达均下降，差异均有显著性（P＜0.01）。 4．与高脂+艾塞那肽组比较，，高脂+艾塞那肽+PI3K抑制剂组细胞内脂滴增多，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平升高，FTO mRNA和蛋白表达均增高，差异均有显著性（P＜0.01）。 结论 1．GLP-1受体激动剂艾塞那肽可减轻肝细胞内脂质沉积，改善肝细胞功能。 2．GLP-1受体激动剂艾塞那肽可能通过PI3k/Akt信号通路抑制FTO基因表达，进而改善肝细胞内脂代谢紊乱，对非酒精性脂肪肝起到治疗作用。
[Abstract]:Background

Non - alcoholic fatty liver disease , which is a disease characterized by alcohol and other clear liver factors , is characterized by excess fat accumulation in the liver . Insulin resistance ( IR ) and oxidative stress are the main pathological physiological bases of the pathogenesis . The study shows that FTO is involved in body weight regulation and is related to insulin resistance and glycolipid metabolism . The study found that the expression level of FTO in the liver of SD rats was increased with the prolonging of the model time , and the lipid metabolism disorder was aggravated . The glucagon - like peptide - 1 ( GLP - 1 ) was used as a new type of drug for the treatment of diabetes . In this study , it is found that GLP - 1 can regulate the metabolism and proliferation of the cells through the 3 - 3 / 3 - 3 - 3 - kinase / 3 - kinase pathway .

Purpose

To investigate the effect of glucagon - like peptide 1 ( GLP - 1 ) receptor agonist exenan on the expression of FTO gene in human normal human hepatocytes L02 cells induced by high fat , and to explore the mechanism of GLP - 1 in the treatment of non - alcoholic fatty liver .

method

L02 cells were cultured with RPMI1640 medium containing 10 % FBS in vitro . L02 cells were induced by RPMI1640 medium containing 50 % FBS . The experiment was divided into 5 groups : 鈶

本文编号：1907770