自噬在大鼠重症急性胰腺炎肠粘膜屏障中的表达及意义

发布时间：2016-11-24 16:57

  本文关键词：自噬在大鼠重症急性胰腺炎肠粘膜屏障中的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。

《河北医科大学》 2014年

自噬在大鼠重症急性胰腺炎肠粘膜屏障中的表达及意义

杨欢  

【摘要】：重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）发病急、进展快、病情重、并发症多，是常见的消化系统疾病，不仅胰腺局部水肿、出血、坏死，往往还伴有其他脏器功能障碍，因此明确SAP的发病机制有重要意义。大量研究证实SAP时，肠道粘膜屏障损伤介导的生理病理改变在其发病过程中起到了非常关键的作用，是并发感染、形成腹腔积液、脓肿,诱发和加重全身炎症反应综合征(systemic inflammatory responsesyndrome,SIRS)、多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunctionsyndrome,MODS)，导致患者死亡的原因所在。 自噬，被称为II型程序性死亡，是近年来备受关注的领域，已有多项研究证实自噬与很多疾病相关，但关于自噬在肠粘膜屏障中发挥的作用研究较少，已有研究发现肠粘膜屏障损伤中存在自噬表达，但机制及作用尚有待进一步探索，因此本研究通过建立重症急性胰腺炎模型，观察自噬在肠粘膜中的表达变化，并运用四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)，即核因子(NF)-κB抑制剂，探讨NF-κB信号通路对肠粘膜自噬的调节，探寻急性胰腺炎发生肠粘膜屏障损伤新的分子机制，为治疗SAP提供新的治疗策略。 目的：观察自噬在左旋-精氨酸腹腔内注射所致重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜中的表达及意义。 方法:120只成年清洁级SD大鼠，平均体重为250±30g,随机分为正常对照组(N)组、重症急性胰腺炎模型(SAP)组和PDTC组，其中PDTC组根据剂量不同分为1mg/kg、10mg/kg、100mg/kg三组，分别记为P1、P10、P100。每个组又分为12h和24h两个时间点,共10组每组12只大鼠。实验前大鼠禁食12h，自由饮水，分两次腹腔注射20%左旋-精氨酸，每次均为2.5g/kg,间隔1h，诱导大鼠SAP模型；PDTC组在建立SAP模型前1h分别按1mg/kg、10mg/kg、100mg/kg进行腹腔注射；对照组腹腔注射等体积0.9%氯化钠。完成后分别在12h、24h处死大鼠，取血清、胰腺、小肠组织。 HE染色后光学显微镜观察各组大鼠胰腺及小肠组织病理切片，Western blot法检测自噬相关基因LC3和Beclin1蛋白及NF-κB p65蛋白在小肠组织中的含量，肠道组织匀浆后测定超氧化物歧化酶(SOD)及丙二酫(MDA)含量，ELISA方法检测血清肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)。 结果：1胰腺组织病理学改变：对照组（N）：胰腺组织结构完整，腺泡小叶及腺体清晰可见，无出血及坏死，12h、24h两时间点无差别。模型组（SAP）：胰腺小叶间高度水肿,腺泡细胞空泡变严重,小叶内炎细胞广泛浸润,并看可见片状坏死和出血，24h比12h，，以上情况更加多见。干预组（P1、P10、P100）：各组亦呈较明显的炎症变化,其中P100组最严重，可见弥漫性腺泡细胞坏死，部分腺泡呈孤岛状，P10组及P1组胰腺炎症明显减轻。 2肠道组织病理学改变：对照组（N）：肠粘膜绒毛排列整齐,上皮细胞层完整,刷状缘光滑,未见明显炎症表现。组内两时间点无差别。模型组（SAP）:肠粘膜上皮细胞变性、坏死,部分脱落以至固有层裸露,绒毛变短、排列紊乱,固有层大量中性粒细胞浸润，毛细血管扩张、充血,24h比12h，粘膜破坏更明显。干预组（P1、P10、P100）：肠粘膜炎症损伤程度中P100组最严重，P1、P10组粘膜破坏程度减轻。 3血清I-FABP：两时间点中SAP组I-FABP表达明显高于N组（P0.05）；应用不同剂量PDTC干预后，与SAP组比较P1、P10组表达降低，但较对照组高（P0.05），而P100组较SAP组无明显变化（P0.05）；在12h，P1与P10组无差异，在24h结果中，P10组I-FABP表达低于P1组（P0.05），SAP、P1两组24h较12h有明显升高（P0.05）,其余三组不同时间点无差异（P0.05）。 4小肠组织匀浆Beclin1：与正常对照组比较，12h及24h SAP组Beclin1明显升高（P0.05），给予PDTC预处理后，与SAP组比较，无论12h及24h，P1及P10表达均减低（P0.05），而P100组在12h与SAP组比较无明显差异（P0.05），在24h则高于SAP组；在两不同时间点，P1与P10均无差异（P0.05）；各组24h与12h比较，除P100组24h较12h表达增高外（P0.05），余四组无差异（P0.05）。 5小肠组织匀浆LC3：与正常对照组比较，SAP组LC3在12h及24h均明显升高（P0.05），给予PDTC预处理后，无论12h及24h，P1及P10表达均较SAP组减低，而P100组LC3表达较SAP组明显升高（P0.05），P1与P10在同时间点无显著差异（P0.05）；各组24h与12h比较，除正常对照组外，SAP、P1、P10、P100组24h均较12h表达增高外（P0.05）。 6小肠组织匀浆p65：12h与24h结果趋势一致，均为SAP组较N组明显增高，予PDTC干预后，P1、P10两组结果较SAP组明显减低，但较对照组高（P0.05），P100与SAP组相比无明显差异（P0.05），其中P10组较P1组低（P0.05）；五不同处理组24h与12h结果相比，SAP、P1、P100三组随时间增长蛋白表达增高（P0.05），对照组及P10组两时间点无明显差异（P0.05）。 7小肠组织匀浆MDA：12h与24h两时间点均为SAP组最高，N组最低，PDTC干预使P1与P10组较SAP组降低，但仍较N组高（P0.05），同时间点SAP组与P100组无统计学差异（P0.05），P1与P10组在12h的结果无显著差异（P0.05），在24h则P1较P10高；各组24h与12h比较，24hSAP组、P100组及P1均较12h增高（P0.05），P1与N组则两时间点结果无差异（P0.05）。 8小肠组织匀浆SOD：在两时间点，SAP组均明显较对照组N低（P0.05），干预后，在12h，P1组无明显升高，与SAP组无统计学差异(P0.05),P100组较SAP低，P10组较SAP组高，但仍较N组低（P0.05）；在24h，SAP、P100组SOD值较12h减低，P10组SOD值较12h升高，P1组则无明显变化(P0.05)。 结论：1腹腔注射L-精氨酸可以成功建立大鼠重症急性腺炎模型，造成胰腺损伤，同时形成肠道粘膜屏障损伤。 2适量NF-κB抑制剂PDTC干预有助于促进急性胰腺炎及肠粘膜屏障功能恢复。 3急性胰腺炎小肠组织中有自噬蛋白Beclin1和LC3表达，且表达水平与肠粘膜屏障损伤程度相关。 4NF-κB信号通路可能参与肠粘膜自噬的调控，抑制NF-κB可抑制自噬形成。 5氧自由基可能诱导自噬形成。

【关键词】：
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R576
【目录】：

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1 纪龙,袁耀宗,徐家裕;核因子-κB与急性胰腺炎[J];国外医学(内科学分册);2000年09期

2 侯丽颖;孙燕佩;张旭光;赵栋;吴坤;;维生素E琥珀酸酯通过Akt/mTOR信号通路诱导人胃癌细胞SGC-7901发生保护性自噬[J];癌变.畸变.突变;2013年05期

3 张翠萍,谢印芝,陈鹏,洪欣,肖忠海,马燕,吕永达;低氧激活巨噬细胞内NF-κB信号转导通路的机制[J];生理学报;2004年04期

4 ;Hsp90 inhibition results in autophagy-mediated proteasome-independent degradation of IκB kinase(IKK)[J];Cell Research;2006年11期

5 ;Hsp90 regulates processing of NF-κB2 p100 involving protection of NF-κB-inducing kinase (NIK) from autophagy-mediated degradation[J];Cell Research;2007年06期

6 张延波;李生兴;陈溪萍;杨丽;张运阁;刘冉;陶陆阳;;大鼠脑外伤后自噬被激活并在早期对受损神经元起保护作用(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2008年03期

7 ;Functional and morphological changes of the gut barrier during the restitution process after hemorrhagic shock[J];World Journal of Gastroenterology;2005年35期

8 Cristina Saro Gismera;Beatriz Sicilia Aladrén;;Inflammatory bowel diseases: A disease (s) of modern times? Is incidence still increasing?[J];World Journal of Gastroenterology;2008年36期

【共引文献】

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1 刘永庆;张营;;急性胰腺炎的综合治疗分析[J];安徽卫生职业技术学院学报;2010年01期

2 刘永庆;解光艾;;急性胰腺炎120例治疗分析[J];安徽医药;2006年01期

3 刁永鹏;陈宏;李非;杨磊;刘大川;朱研;贾建国;;急性胰腺炎肠屏障功能改变及理气通下合剂保护作用观察[J];中华中医药杂志;2010年09期

4 严奉伟;朱建飞;吴谋成;;功能食品清除自由基活性评价方法及其进展[J];长江大学学报(自科版)农学卷;2006年04期

5 占乐云;简道林;陈小波;向常清;吕作均;佟华丽;;腹腔复苏对失血性休克家兔肠黏膜屏障的影响[J];重庆医学;2011年34期

6 童智慧;李维勤;;重症急性胰腺炎的肠内营养支持[J];肠外与肠内营养;2007年01期

7 陶然君;陈尔真;陆一鸣;;早期肠内营养治疗重症急性胰腺炎的作用探讨[J];肠外与肠内营养;2007年03期

8 刘海燕;李维勤;黎介寿;刘放南;于宝军;;腹腔感染病人肠黏膜通透性的变化[J];肠外与肠内营养;2008年06期

9 丁凯;李维勤;;重症急性胰腺炎病人的肠黏膜屏障功能障碍[J];肠外与肠内营养;2008年06期

10 童智慧;李维勤;虞文魁;王新颖;叶向红;李宁;黎介寿;;早期肠内营养添加谷氨酰胺对重症急性胰腺炎炎症反应和免疫功能的影响[J];肠外与肠内营养;2009年05期

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1 寇秋野;张晓菲;;重新认识选择性消化道去污[A];重症医学——2011[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 汪建华;重症胰腺炎继发感染的功能显像诊断及比较影像学研究[D];第二军医大学;2011年

2 甘华;连续性静脉静脉血液滤过在危重症患者抢救中的应用及价值[D];重庆医科大学;2003年

3 苏洋;肠粘膜屏障功能与胆色素结石形成之间关系的实验研究[D];中国医科大学;2006年

4 黄晓曦;持续早期肠内营养联合“护肠合剂”对重症急性胰腺炎患者的影响[D];复旦大学;2006年

5 齐志伟;缺血性脑卒中诱发肠屏障改变的实验研究[D];中国协和医科大学;2007年

6 黄骞;肠上皮细胞谷氨酰胺载体B～0AT1/ASCT2的克隆表达及严重创伤后的功能调控研究[D];第二军医大学;2007年

7 周瑜;单纯疱疹病毒性脑炎发病机制及靶向MMP-9基因治疗的研究[D];华中科技大学;2009年

8 于向阳;肠梗阻导致肠功能障碍的中西医结合实验研究Ⅱ[D];天津医科大学;2009年

9 曹丽丽;自噬在癫痫大鼠海马损伤中的作用及机制研究[D];山东大学;2009年

10 熊玉霞;泻心汤有效组分对重症急性胰腺炎相关性肠/肺损伤的保护作用与机制研究[D];成都中医药大学;2009年

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1 崔轶;IL-27在炎症性肠病炎症肠黏膜中的表达及意义[D];郑州大学;2010年

2 邵波;大鼠蛛网膜下腔出血后自噬激活和早期脑损伤的研究[D];浙江大学;2011年

3 赵武波;ω-3鱼油脂肪乳对重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障功能的影响[D];山西医科大学;2011年

4 李振华;急性坏死性胰腺炎肠黏膜损伤质粒示踪细菌易位实验研究[D];南华大学;2011年

5 蔡青山;早期肠内营养与肠外营养对进展期胃癌术后患者支持效果的比较[D];宁夏医科大学;2010年

6 彭晶晶;谷氨酰胺对重症急性胰腺炎大鼠模型肠黏膜屏障的保护作用及机制研究[D];华中科技大学;2010年

7 张占飞;内毒素和D-乳酸在重症急性胰腺炎肠道损伤早期诊断中的作用[D];青海大学;2011年

8 王德杰;高原兔肝脏火器伤后机体应激性变化的研究[D];石河子大学;2011年

9 刘铁军;SPV对保护重度创伤—失血性休克大鼠肠通透性作用的研究[D];河北联合大学;2011年

10 王占启;腹内高压兔模型相关指标的测定与肠道屏障功能相关性的研究[D];大连医科大学;2011年

【二级参考文献】

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1 贾莉;张海金;王栋;吴坤;;维生素E琥珀酸酯经由活性氧诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡[J];癌变.畸变.突变;2009年03期

2 张志宏;黄晓莉;贾莉;张旭光;王晓琳;吴坤;;线粒体复合物在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用[J];癌变·畸变·突变;2012年06期

3 冷启新,hotmail.com,刘执玉,李瑞祥;核因子κB(Nuclear Factor κB,NF-κB):一个新的治疗目标[J];解剖科学进展;1999年04期

4 于淼;王玉华;;维生素E琥珀酸酯抗肿瘤作用的研究进展[J];实用肿瘤学杂志;2008年01期

5 丁桂霞,陈荣华,张爱华,吴元俊,潘晓勤;核因子-κB反义寡核苷酸对系膜细胞炎症因子基因表达的影响[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2002年02期

6 徐玲;曲秀娟;刘云鹏;刘静;丁小娣;侯科佐;张晔;;保护性自噬对5-FU诱导的胃癌细胞凋亡的抑制作用[J];世界华人消化杂志;2011年08期

7 ;Inflammatory bowel disease in Estonia:a prospective epidemiologic study 1993-1998a[J];World Journal of Gastroenterology;2001年03期

8 Laszlo Lakatos;Gabor Mester;Zsuzsanna Erdelyi;Mihaly Balogh;Istvan Szipocs;Gyorgy Kamaras;Peter Laszlo Lakatos;;Striking elevation in incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in a province of western Hungary between 1977-2001[J];World Journal of Gastroenterology;2004年03期

9 Annika Lapidus;;Crohn's disease in Stockholm County during 1990-2001:An epidemiological update[J];World Journal of Gastroenterology;2006年01期

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1 王贵娟;肠粘膜铁吸收和转运的研究进展[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);2002年05期

2 文黎明;张正;陈先菊;;神经降压素与肠粘膜屏障功能[J];世界华人消化杂志;2001年07期

3 孟德胜,汪仕良;烫伤大鼠肠粘膜环氧合酶活性和mRNA表达的变化[J];中华烧伤杂志;2002年04期

4 王彤,赵欣,王尧华;肠内早期中药干预对肠粘膜屏障的保护作用[J];中国中西医结合外科杂志;2003年05期

5 王鹏;陈嘉勇;袁勇;;肠缺血再灌注损伤与肠粘膜细胞凋亡的关系[J];昆明医学院学报;2009年S2期

6 赵云,王凤君,王裴,尤忠义,彭曦,汪仕良;胰高血糖素样肽-2对烧伤大鼠肠粘膜细胞增殖的影响[J];中华烧伤杂志;2003年04期

7 邵洪，尤忠义，汪仕良，黎鳌，曹卫;严重烧伤早期肠粘膜屏障功能改变及肠道营养的实验研究[J];中华医学杂志;1994年02期

8 凌宗秀,张安,罗真春,秦开秀;谷氨酰胺对危重患者肠粘膜保护作用的临床研究[J];重庆医学;1999年03期

9 彭曦;颜洪;陶麟辉;赵云;王裴;汪仕良;;早期肠道营养对烧伤大鼠肠粘膜损伤和修复的影响[J];世界华人消化杂志;2000年11期

10 石文;辛乃军;马印东;杨涛;贾军;姜金珠;郭成浩;宋国栋;;重组人生长激素对烧伤大鼠肠粘膜细胞凋亡的作用[J];山东大学学报(医学版);2009年05期

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1 陈传莉;王裴;刘依凌;李牧;刘琛;刘行;王凤君;;肌球蛋白轻链激酶介导的肌球蛋白轻链磷酸化在严重烧伤早期肠粘膜屏障损害中的作用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

2 陈传莉;王裴;刘依凌;李牧;刘琛;刘行;王凤君;;肌球蛋白轻链激酶介导的肌球蛋白轻链磷酸化在严重烧伤早期肠粘膜屏障损害中的作用[A];第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

3 石文;辛乃军;马印东;杨涛;贾军;姜金珠;郭成浩;宋国栋;;重组人生长激素对烧伤大鼠肠粘膜细胞凋亡的作用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

4 程爱国;;完全饥饿状态下肠屏障功能的损害与保护[A];第五届全国灾害医学学术会议暨常州市医学会急诊危重病及灾害医学专业委员会首届年会学术论文集[C];2009年

5 李钢;陈海平;王凯诚;;中药保护急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障的系列研究之二——肠粘膜形态学改变[A];第九届全国中西医结合普通外科学术交流大会暨胆道胰腺疾病新进展学习班论文汇编[C];2005年

6 苏华芳;江松福;俞康;;ITF对MTX所致肠粘膜细胞损伤防护机制的初步研究[A];中华医学会第11届全国内科学术会议论文汇编[C];2007年

7 刘克玄;吴伟康;孙惠兰;赵明奇;;四逆汤对大鼠肠缺血再灌注后肠粘膜细胞凋亡的影响及神经酰胺机制[A];全国中西医结合基础理论学术研讨会论文集[C];2004年

8 苏华芳;江松福;俞康;;ITF对MTX所致肠粘膜细胞损伤防护机制的初步研究[A];第七届全国血液免疫学学术大会暨2008年浙江省血液病学术年会论文汇编[C];2008年

9 苏华芳;江松福;俞康;;ITF对MTX所致肠粘膜细胞损伤防护机制的初步研究[A];2007年浙江省血液病学术年会论文汇编[C];2007年

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1 袁志强;HSP70在烧伤早期肠粘膜损害中的保护作用及其机制研究[D];第三军医大学;2004年

2 邓志云;免疫营养对烫伤鼠肠粘膜的保护作用及其在烧伤病人中的应用[D];南昌大学;2006年

3 宋国栋;重组人生长激素对烧伤大鼠肠粘膜屏障及肠源性感染影响的研究[D];山东大学;2004年

4 易为民;肠内免疫营养对梗阻性黄疸大鼠肠粘膜屏障保护作用分子机制的研究[D];中南大学;2007年

5 刘卫;手术前开始应用生长激素对肠外营养病人蛋白质代谢、肌肉功能、肠粘膜屏障和细胞免疫功能的影响[D];中国协和医科大学;1999年

6 赵云;胰高血糖素样多肽-2的重组表达及其对肠道保护作用机制的实验研究[D];第三军医大学;2006年

7 邢锐;重组人TFF2在乳酸链球菌中表达及其对实验性肠道损伤的保护作用[D];第一军医大学;2006年

8 白满喜;谷氨酰胺双肽对创伤后肠粘膜形态和肠屏障功能的影响及分子生物学机制的系列研究[D];中国协和医科大学;1995年

9 张琳;肠道微生态环境与儿童过敏性疾病的关系以及参芪健脾方对肠粘膜屏障功能修复和免疫功能调整的研究[D];河北医科大学;2011年

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1 郝彦开;组织胺对肠粘膜屏障保护作用的实验研究[D];河北医科大学;2009年

2 卢艳;兔重症急性胰腺炎肠粘膜屏障的损伤与保护机制研究[D];山东大学;2012年

3 侯传国;腹部手术对肠粘膜屏障功能的影响[D];天津医科大学;2009年

4 冯浩;亚低温对肠粘膜屏障功能的影响[D];天津医科大学;2013年

5 张磊;rhGH早期应用对严重烧伤后肠粘膜屏障功能影响的研究[D];山东大学;2007年

6 崔成杰;重组人生长激素对梗阻性黄疸大鼠肠粘膜ICAM-1的影响[D];延边大学;2009年

7 李来;不同营养支持对肝硬化门静脉高压大鼠肠粘膜屏障功能的影响[D];青岛大学;2004年

8 华向东;急性坏死性胰腺炎肠粘膜屏障功能障碍及生长激素的保护作用[D];中国医科大学;2004年

9 巩守超;胰岛素与rhGH早期联合应用对严重烧伤大鼠肠粘膜保护作用的研究[D];山东大学;2010年

10 田伟;生长激素对重症急性胰腺炎肠粘膜原癌基因c-jun的影响[D];山西医科大学;2005年

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本文编号：190992