蛋白C系统在溃疡性结肠炎中的变化及可能的作用

发布时间：2018-05-30 03:30

  本文选题：蛋白C系统 + 溃疡性结肠炎　； 参考：《生理学报》2015年02期

【摘要】：血液高凝状态、血栓形成是导致溃疡性结肠炎(ulcerate colitis,UC)恶化的主要原因。本文旨在探讨蛋白C(protein C,PC)系统在UC小鼠中的变化及其可能的作用。(1)体内实验:采用饮用4%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)复制小鼠UC模型,造模后1周观察体重、结肠长度、脾重变化,并进行大体积分、组织学积分,免疫荧光法观察结肠平滑肌组织巨噬细胞数量,ELISA法测定血浆TNF-α、IL-6水平;活体荧光显微镜观察结肠黏膜微血管循环,免疫比浊法观察PC、蛋白S(protein S,PS)活性,免疫组化观察内皮细胞蛋白C受体(endothelial cell protein C receptor,EPCR)、血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)表达。(2)体外实验:分离小鼠结肠组织巨噬细胞,测定上清液中TNF-α、IL-6水平;分离、培养小鼠结肠黏膜微血管内皮细胞,分别以TNF-α、IL-6刺激后,检测其PC、PS、激活的蛋白C(activated protein C,APC)活性及EPCR、TM的表达。体内实验结果显示,与对照组相比,DSS组小鼠体重减轻(P0.05),结肠缩短(P0.05),伴脾重增加(P0.05),结肠组织学积分升高(P0.05),结肠组织大量巨噬细胞浸润,血浆TNF-α、IL-6水平显著升高(P0.01);活体显微镜结果显示,DSS组小鼠结肠黏膜微血管中白细胞与血管内皮细胞的粘附力大大升高(P0.01),同时,血浆PC、PS活性明显降低(P0.01或P0.05),结肠组织EPCR表达下调(P0.01)。相关性分析表明,结肠炎症程度与PC活性呈负相关。体外实验结果显示,DSS小鼠结肠组织中分离的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6水平均比对照组升高(P0.05),而TNF-α或IL-6与小鼠结肠黏膜微血管内皮细胞共孵育后,内皮细胞APC活性明显降低(P0.05或P0.01),其表达EPCR的能力均有所降低(P0.05)。以上结果提示,UC时PC系统被抑制,其可能的机制是巨噬细胞通过分泌促炎细胞因子进一步影响血管内皮细胞功能,从而抑制PC系统。提高PC系统水平可能是治疗UC的新策略。
[Abstract]:Blood hypercoagulability and thrombosis are the main causes of ulcerate colitis. The aim of this study was to investigate the changes and possible effects of the protein C(protein Con PCS system in UC mice. The mice UC model was established by drinking 4% dextran sodium sulfate sodium DSS. the body weight, colon length and spleen weight were observed 1 week after the establishment of the model. Gross score, histological score, immunofluorescence assay and Elisa were used to detect the level of TNF- 伪 and IL-6 in plasma, and microvascular circulation in colonic mucosa was observed by fluorescence microscope in vivo, and the number of macrophages in colonic smooth muscle tissue was measured by Elisa. Immunoturbidimetric assay was used to observe the activity of S(protein, and immunohistochemistry was used to observe the expression of endothelial cell protein C receptor (EPCR) and thrombomodulin (TMN). In vitro, the macrophages of mouse colon were isolated, the levels of TNF- 伪 and IL-6 in the supernatant were measured, and the expression of TNF- 伪 and IL-6 in the supernatant was determined. Murine colon microvascular endothelial cells were cultured and stimulated with TNF- 伪 -IL-6. The activity of PCP, the activated protein C(activated protein CnAPCand the expression of EPCR- TM were detected. The results of in vivo experiments showed that compared with the control group, the mice in the DSS group lost weight, shortened the colon, increased the weight of the spleen, increased the histological score of the colon, increased the histological score of the colon and infiltrated a large number of macrophages in the colon. The levels of plasma TNF- 伪 and IL-6 increased significantly (P 0.01), and the adhesion between leukocytes and vascular endothelial cells in the colonic mucosa of mice in DSS group was significantly increased. At the same time, the activity of plasma TNF- 伪 and IL-6 decreased significantly (P 0.01 or P 0.05), and the expression of EPCR in colon tissue decreased P0.01a. Correlation analysis showed that the degree of colitis was negatively correlated with PC activity. The results of in vitro experiments showed that the level of TNF- 伪 IL-6 secreted by macrophages isolated from colonic tissue of DSS mice was higher than that of control group (P 0.05). However, TNF- 伪 or IL-6 was incubated with murine colonic mucosal microvascular endothelial cells (MECs). The activity of APC in endothelial cells decreased significantly (P0.05) or P0.01 (P 0.01), and the ability of EPCR expression in endothelial cells decreased (P 0.05). These results suggest that the PC system is inhibited during UC, and the mechanism may be that macrophages further affect the function of vascular endothelial cells by secreting pro-inflammatory cytokines, thereby inhibiting the PC system. Improving the level of PC system may be a new strategy for the treatment of UC.
【作者单位】： 河南大学淮河医院检验科;河南大学第一附属医院肾内科;河南大学淮河医院消化内科;河南大学淮河医院普外科;
【基金】：supported by the National Natural Science Foundation of China(No.U1304802) the Research Foundation of Henan University,China(No.2012YBZR020)
【分类号】：R574.62;R446.6

【参考文献】

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【共引文献】

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