小剂量辣椒素对大鼠内脏机械及化学刺激敏感性的影响及机制研究

  本文关键词：小剂量辣椒素对大鼠内脏机械及化学刺激敏感性的影响及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《四川医科大学》 2015年

小剂量辣椒素对大鼠内脏机械及化学刺激敏感性的影响及机制研究

胡容  

【摘要】：目的:通过检测大鼠在不同时期摄食小剂量辣椒素(capsaicin,CAP),对内脏机械和化学刺激的敏感性,胃十二指肠组织内辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid,TRPV1)的表达,胃、十二指肠粘膜屏障的变化,探讨大鼠摄食小剂量辣椒素对内脏机械及化学刺激敏感性的影响及机制。方法:(1)CAP饲料的配制:50%CAP 2mg,加入到普通饲料粉100g,混匀,即得到CAP浓度为10mg/Kg的CAP饲料。(2)实验动物及分组:SD大鼠160只,随机分为实验组(A组)与对照组(B组),每组80只,雌雄各半。A组摄食CAP饲料,CAP 1mg/kg/d,B组摄食普通饲料。为了探索CAP在不同时期对大鼠内脏机械和化学刺激的影响,实验分为5期,按相应时期,A组与B组各分为5个小组,每组16只,雌雄各半。具体分期及时间:Ⅰ期:1天,实验组(A1组):摄食CAP饲料,完成后给予普通饲料,自由进水;对照组(B1组):自由摄食进水;Ⅱ期:3天,实验组(A2组):摄食CAP饲料,完成后给予普通饲料,自由进水;对照组(B2组):自由摄食进水;Ⅲ期,1周:实验组(A3组):摄食CAP饲料,完成后给予普通饲料自由进水;对照组(B3组):自由摄食进水;Ⅳ期:2周,实验组(A4组):摄食CAP饲料,完成后给予普通饲料,自由进水;对照组(B4组):自由摄食进水。Ⅴ期:4周,实验组(A5组):摄食CAP饲料,完成后给予普通饲料,自由进水;对照组(B5组):自由摄食进水。(3)内脏机械刺激敏感性测定:采用直肠扩张试验(rectal distention test,RDT):诱导大鼠排尽直肠内粪便,石蜡油涂抹肛周,10FR导尿管气囊端缓慢置入大鼠直肠,胶布固定于尾部,用5ml空针缓慢向气囊内匀速注气,边注气边观察大鼠腹部撤离反射(abdominal withdrawal reflex,AWR),直到大鼠行为达到AWR评分的4分,结束注气。(4)内脏化学刺激敏感性测定:采用腹腔注射新斯的明的方法:用1ml注射器向腹腔内注射浓度为60ug/ml新斯的明注射液,剂量为120ug/Kg,观察大鼠AWR行为,记录大鼠出现AWR评分3-4分的行为的开始时间及持续时间。(5)检测指标及方法:①实验过程中大鼠一般情况。②机械刺激的气囊扩张体积,各组大鼠行RDT,直到大鼠行为达到AWR评分的4分。③腹腔注射新斯的明大鼠出现AWR评分3-4分行为的开始时间及持续时间。④胃、十二指肠组织内TRPV1的表达情况:用免疫组化方法进行TRPV1的检测。⑤胃、十二指肠粘膜屏障的检测:各组大鼠脱臼处死,沿胃大弯剪开胃及十二指肠后用生理盐水将胃内容物冲洗干净,肉眼观察粘膜形态,采用Guth标准改良评分评定胃、十二指肠粘膜损伤情况;并取距幽门约1cm处胃大弯侧组织3块,十二指肠组织3块,送病理组织学检查,光镜下对HE染色后胃、十二指肠组织进行观察。结果:(1)大鼠一般情况:实验过程中,实验组及对照组大鼠均精神状态良好,行动灵活,食欲佳,皮毛光滑,大小便正常,体重增加。(2)机械刺激的气囊扩张体积(ml):Ⅰ期、Ⅱ期实验组与对照组之间均无显著差异(P0.05);但A2组中雄性大鼠的气囊扩张体积(2.24±0.13)显著小于B2组中雄性大鼠(2.56±0.21)(P0.05)。Ⅲ期实验组气囊扩张体积(1.91±0.33)显著小于对照组(2.30±0.30)(P0.05),且实验组中雌性气囊扩张体积显著小于雄性(1.68±0.10 vs 2.15±0.30,P0.05)。Ⅳ期实验组与对照组差异无统计学意义(P0.05)。Ⅴ期实验组气囊扩张体积(2.85±0.33)显著大于对照组(2.40±0.53)(P0.05)。(3)腹腔注射新斯的明大鼠出现AWR评分3-4分行为的开始时间及持续时间:①开始时间(min):Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期实验组与对照组之间均无显著差异(P0.05);Ⅴ期实验组AWR评分达到3-4分的开始时间较对照组显著延长(5.91±1.74 vs 4.49±1.53P0.05)。②持续时间(min):Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅳ期、Ⅴ期实验组与对照组之间无显著差异(P0.05);Ⅲ期实验组AWR评分达到3-4分的持续时间较对照组显著延长(6.30±3.16 vs 3.13±1.16 P0.05)。(4)胃、十二指肠TRPV1的表达结果:①胃黏膜TRPV1光密度(PI)值:Ⅰ期实验组大鼠TRPV1的PI值(1.97±0.46)显著高于对照组(1.60±0.25)(P0.05),Ⅱ期实验组大鼠TRPV1的PI值(2.14±0.54)显著高于对照组(1.63±0.51)(P0.05),Ⅲ期实验组大鼠TRPV1的PI值(2.16±0.44)显著高于对照组(1.65±0.43)(P0.05);Ⅳ期、Ⅴ期实验组与对照组之间差异无统计学意义(P0.05)。②十二指肠黏膜TRPV1光密度(PI)值:Ⅰ期实验组大鼠TRPV1的PI值(1.87±0.38)显著高于对照组(1.60±0.25)(P0.05)、Ⅱ期实验组大鼠TRPV1的PI值(1.80±0.44)显著高于对照组(1.61±0.31)(P0.05),Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期实验组与对照组差异无统计学意义(P0.05)。(5)胃、十二指肠粘膜屏障的检测:肉眼观察:所有实验组及对照组大鼠胃、十二指肠粘膜光滑,无明显异常。病理学观察:所有标本粘膜完整无损,绒毛排列整齐,组织结构完整,无炎性细胞浸润。结论:1.大鼠摄入小剂量CAP连续1周对内脏机械刺激的敏感性显著增加,连续2周敏感性逐渐恢复至正常,连续4周敏感性显著降低。2.大鼠摄入小剂量CAP连续1周对内脏化学刺激的敏感性显著增加,连续4周,敏感性显著降低。3.雌性大鼠对内脏机械刺激较雄性大鼠更为敏感。4.摄入小剂量CAP(1mg/kg/d)从1天到4周,大鼠胃、十二指肠粘膜屏障均无明显影响。5.大鼠摄入小剂量CAP可以调节胃、十二指肠组织TRPV1的表达,可能与大鼠机械和化学刺激敏感性的变化有相关性。

【关键词】：
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R57
【目录】：

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