荧光定量PCR检测血清miR-21在肝纤维化诊断中的研究

发布时间：2018-06-15 21:45

本文选题：肝纤维化 + miR-21　；参考：《长江大学》2017年硕士论文

【摘要】：背景:肝纤维化(Hepatic Fibrosis)是各种病因导致慢性肝损伤的共同病理过程,以细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积为主要病理特征,这种病理改变可破坏肝组织的正常结构及功能,可进展为肝硬化(cirrhosis),并出现相关严重并发症,如大量腹水、食管胃底静脉曲张破裂出血、肝性脑病等全身多系统功能受损;同时也有可能导致肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的发生,HCC是原发性肝癌中的主要类型,在亚太地区的癌症死亡原因中排第三[1]。慢性乙型病毒性肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)作为肝纤维化、肝硬化的主要危险因素,在全球范围流行,即使预防疫苗已得到了广泛使用,但仍存在大量感染者。而且慢性丙型肝炎(Chronic Hepatitis C,CHC)也在肝纤维化、肝硬化及肝细胞癌的病因中开始崭露头角,那些由CHC发展为肝细胞癌的患者在多数情况下已经确定有肝硬化的存在[2]。因为大多数肝纤维化患者早期并无特殊临床表现,故寻求及早诊断肝纤维化且相对简便的方法对防止肝硬化具有十分重要的意义。目前肝组织活检(Liver Biospy,LB)仍然是诊断肝纤维化及肝硬化的“金标准”,但此检查为有创检查,可能导致各种严重并发症,如出血、感染等,更有甚者可导致受检者死亡,而且该检查存在一定的取样误差和阅片误差,所以此检查并不为广大肝病患者所接受;近年来,肝脏瞬时弹性成像技术(Transient elastography,TE)已被广泛应用于临床,此检查具有无创、重复性好、耐受性佳等优点,但是结果的准确性也同时受到多方面因素的影响,如大量腹水、肋间隙过窄等均可能导致操作失败,肝脏炎症、胆汁淤积、肝脏淤血、进食等可影响肝脏硬度(Liverstiffness measurement,LSM)。目前用于临床的肝纤维化四项血清学指标分别是透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(TypeⅢprocollagen N peptide,PⅢNP)、Ⅳ型胶原(TypeⅣcollagen,Ⅳ-C)、层粘连蛋白(Laminin,LN),它们虽然可不同程度地反映出慢性肝炎肝脏病理损害的程度,但仍然不能作为独立诊断肝纤维化的单项血清学指标,在灵敏度及特异度方面均欠佳。故寻找灵敏度高、特异性好的非创伤性指标,是肝纤维化诊断研究的一个热点。近年来,有不少学者将目光聚集到微小核糖核酸(micro Ribonucleics,miRNAs),MiRNAs是一类内生的、长度约22个核苷酸的小RNA。MiRNAs参与多种疾病的病理过程,是疾病重要的候选诊断标志和潜在的治疗靶点。MiRNAs在细胞内具有多种重要的调节作用,能对靶基因进行转录后调控,据推测,miRNAs可参与调节人类三分之一的基因。既往对miRNAs的研究多见于肿瘤方面,在器官纤维化方面的研究还相对较少。目前发现一部分miRNAs分子可对纤维化起到调控作用。miR-21就是其中之一,多项研究表明miR-21在多个器官的纤维化中呈高水平表达,对纤维化起促进作用。因此,mi R-21在肝纤维化患者外周血中的表达水平有望作为血清学指标用于早期发现肝纤维化,使肝纤维化患者能得到早期治疗,病情得到良好的控制。目的:拟利用实时荧光定量PCR测定miR-21在肝纤维化中的表达水平,并与正常对照组、肝硬化组及肝癌组miR-21的表达水平进行比较,明确miR-21作为血清学指标用于肝纤维化的诊断上是否可行。方法:1.选取2016年1月至2016年10月在荆州市中心医院就诊,根据症状体征并行多项相关检查综合判断,确诊为肝纤维化(F)、肝硬化(C)、肝癌(H)的患者为研究对象,各选10例,另外选择健康人(N)10例作为阴性对照。待检患者均需签署知情同意书,同时申请荆州市中心医院伦理委员会的审核批准。2.征得病人同意后,由病房护士或者检验科专职采血人员进行静脉取血,每人采集1管血,用EDTA抗凝的紫头管采集,用于后续的PCR检测以及免疫分析。3.利用荧光定量PCR技术检测血清中miR-21的表达水平。4.统计分析将不同分组的miR-21的相对表达量进行统计学分析,并对肝纤维化组患者血清中miR-21的相对表达量与其他临床指标进行相关性分析,明确miR-21作为血清学指标用于肝纤维诊断上的可行性。结果:1.利用SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测出了人血清中的miR-21表达水平,熔解曲线呈单一峰型,说明特异性好。2.正常对照组、肝纤维化组、肝硬化组、肝癌组四组受试者的miR-21相对表达量之间具有显著性统计学差异(p=0.000)。3.血清miR-21在肝纤维化组中的相对表达量高于正常对照组、同时低于肝硬化组及肝细胞癌组(p=0.022,p=0.047,p=0.037,p均0.05)。4.肝纤维化组中miR-21的相对表达量与年龄、性别、PⅢNP、Ⅳ-C、LN无明显相关性(p0.05),与HA呈正相关(p=0.027)。结论:1.作为人血清中的miR-21表达水平的检测方法,SYBR Green I实时荧光定量PCR法具有简单方便、灵敏、特异性好的优点。2.人血清miR-21的检测有助于早期诊断肝纤维化,且该指标与肝病的发生发展密切相关,能为肝病患者的病情进展提供分子依据。
[Abstract]:BACKGROUND : Hepatic fibrosis is a co - pathological process of chronic liver injury caused by various etiologies . Chronic Hepatitis B is a major risk factor for liver fibrosis and cirrhosis . It is prevalent in the world . Even if the vaccine has been widely used in the world , there are still a lot of patients with infection . In addition , chronic hepatitis C ( CHCs ) is emerging in the etiologies of liver fibrosis , liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma . In most cases , patients with hepatocellular carcinoma have been identified with cirrhosis . In recent years , liver biopsy ( LB ) has been widely used in the diagnosis of liver fibrosis and liver cirrhosis . In recent years , many researches have shown that miR - 21 plays a role in regulating liver fibrosis . Results : 1 . The relative expression of miR - 21 in liver fibrosis group was higher than that in normal control group ( p = 0 . 022 , p = 0.047 , p = 0.037 , p = 0 . 05 ) .
【学位授予单位】：长江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R575.2

【参考文献】