大鼠肝纤维化发生过程中PERK-eIF2α-ATF4通路信号蛋白表达的研究
发布时间：2018-06-27 12:07
本文选题：大鼠 + 肝纤维化 ； 参考：《贵阳医学院》2014年硕士论文
【摘要】：目的： 观察四氯化碳(CC14)致大鼠肝纤维化发生过程中肝组织内质网相关蛋白磷酸化的蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase, PERK)、磷酸化的真核细胞起始因子2a (eukaryotic translation initator factor 2,eIF2a)及转录激活因子4(activating transcription factor 4, ATF4)蛋白表达的变化,探讨内质网应激信号转导通路中PERK-eIF2α-ATF4通路在肝纤维化的发生发展中可能的作用。方法：雄性Wistar大鼠40只,180g-200g,随机分为正常对照组和肝纤维化组。肝纤维化组用40%CC14植物油溶液0.3ml/100g皮下注射,间隔三天注射一次来制备大鼠肝纤维化模型,正常组大鼠皮下注射等量植物油溶液。分别在实验2周、4周、8周及12周末杀鼠,取大鼠肝脏,测定肝脏指数,通过HE染色观察肝组织的病理改变,免疫组化及Western blotting分别检测肝脏组织中p-PERK、p-eIF2a和ATF4蛋白表达变化,并用Real-time PCR方法检测肝脏组织中ATF4 mRNA及CHOP mRNA表达的变化。结果：肝指数及肝脏病理学检查结果显示造模4周大鼠肝脏出现纤维结缔组织增生,8周组大鼠肝脏纤维结缔组织增生更加明显,12周组大鼠肝脏可见假小叶形成。免疫组化显示各组大鼠肝组织中p-PERK、p-eIF2a和ATF4主要在肝细胞胞浆中表达,半定量分析发现肝纤维化2周组大鼠肝组织中p-PERK和p-eIF2a蛋白表达的阳性率较正常对照2周组大鼠变化不明显(P0.05),肝纤维化2周组大鼠肝组织中ATF4蛋白表达阳性率高于正常对照2周组大鼠(P0.01)；肝纤维化4周组、8周组和12周组大鼠肝组织中的p-PERK、p-eIF2a和ATF4蛋白表达的阳性率较相应正常对照组显著增加(P0.01),且较肝纤维化2周组阳性表达率明显增高(P0.01)；肝纤维化8周组大鼠肝脏p-PERK、p-eIF2a和ATF4蛋白表达的阳性率明显高于肝纤维化4周组(P0.01)；肝纤维化12周组大鼠肝脏p-PERK蛋白表达的阳性率明显高于肝纤维化4周及8周组(P0.01),但是p-eIF2a和ATF4在肝纤维化12周组大鼠肝脏蛋白表达的阳性率虽明显高于肝纤维化4周组,却与肝纤维化8周组比较差异无显著性(P0.05)。Western blotting蛋白印迹分析结果显示各组大鼠肝组织均可检测到p-PERK、eIF2a和ATF4蛋白表达。p-PERK、p-eIF2a和ATF4在肝纤维化2周组大鼠肝脏中蛋白表达较正常对照2周组大鼠无明显变化(P0.05)；肝纤维化4周组、8周组及12周组大鼠肝组织中p-PERK蛋白表达随肝纤维化进展明显增加,且各组间差异均有显著性(P0.01)；肝纤维化4周组大鼠肝组织p-eIF2a蛋白的表达明显较肝纤维化2周组大鼠增加(P0.01),肝纤维化8周大鼠和12周组大鼠肝脏p-eIF2a蛋白的表达较肝纤维化2周和4周组大鼠也有明显的高表达(P0.01),但肝纤维化、12周组与肝纤维化8周组大鼠肝脏p-eIF2a蛋白的表达无明显差异(P0.05)；进一步对肝纤维化大鼠肝组织ATF4蛋白表达的研究发现,肝纤维化2周组和4周组大鼠肝组织ATF4蛋白的表达变化不明显(P0.05),从肝纤维化8周开始大鼠肝脏ATF4蛋白表达明显增高,较肝纤维化2周和4周组差异有显著性(P0.01),肝纤维化12周组大鼠肝脏ATF4蛋白的表达达到高峰,较肝纤维化2周、4周及8周组均有明显差异(P0.01)。Real-time PCR结果显示肝纤维化2周组大鼠肝组织ATF4 mRNA的表达与相应正常对照组比较无明显差异(P0.05)；肝纤维化4周、8周、12周组大鼠肝组织中ATF4 mRNA的表达较相应对照组均有明显升高(P0.05),且随肝纤维化进展ATF4 mRNA的表达均显著增加,在肝纤维化12周组大鼠肝组织中ATF4 mRNA的表达较肝纤维化模型2周(P0.01)、4周(P0.01)和8周组(P0.05)均显著增高。我们还观察了各组大鼠肝组织CHOP mRNA表达,结果发现肝纤维化2周组大鼠肝组织CHOP mRNA的表达与相应正常对照组比较无明显差异(P0.05)；肝纤维化4周组CHOP mRNA的表达与肝纤维化2周组变化差异也无统计学意义(P0.05)；从肝纤维化8周组开始大鼠肝脏CHOP mRNA的表达明显增高,较肝纤维化2周和4周组差异有显著性(P0.01)；肝纤维化12周组CHOP mRNA的表达较肝纤维化2周、4周有明显差异(P0.01),但与肝纤维化8周组比较无统计学意义(P0.05)。结论：在CC14诱导的大鼠肝纤维化发生发展过程中,肝细胞内质网应激可致PERK-eIF2a-ATF4信号通路蛋白活化明显增加,提示肝细胞内质网应激PERK-eIF2a-ATF4信号通路可能通过激活下游凋亡促进因子CHOP表达影响肝细胞凋亡,参与了肝纤维化的发生发展过程。
[Abstract]:鐩殑锛，
本文编号：2073869
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