二烯丙基二硫诱导大鼠肝星状细胞HSC

  本文关键词：二烯丙基二硫诱导大鼠肝星状细胞HSC-T6凋亡的作用及机制，，由笔耕文化传播整理发布。

《南华大学》 2015年

二烯丙基二硫诱导大鼠肝星状细胞HSC-T6凋亡的作用及机制

唐美英  

【摘要】：目的:观察二烯丙基二硫(DADS)在体外对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响,并探讨DADS是否通过抑制bcl-2、促进bax的表达来诱导细胞凋亡,从而起抗肝纤维化作用。方法:1.分别用不同浓度的DADS(0、50、100、200、400、800μmol/L)处理HSC-T6细胞不同时间(24、48、72h)后,CCK-8法检测DADS对细胞的增殖抑制作用,得出最适浓度范围及作用时间,并根据此结果调整后续实验的药物浓度及作用时间;2.光学倒置显微镜观察细胞形态后,Hoechst33342染色法观察细胞核凋亡形态学变化;3.流式细胞术检测细胞周期(PI单染法)和细胞凋亡率(Annexin-FITC/PI双染法);4.分别用Western Blot及免疫细胞化学法检测不同浓度DADS对Bcl-2、Bax表达的影响。结果:1.DADS对HSC-T6体外增殖抑制作用明显,呈浓度依赖性,并得出药物作用48h后效果最佳,其IC50为292μmol/L,调整后续实验药物浓度为0、150、300、600μmol/L;2.DADS能引起细胞学形态显著变化。光学倒置显微镜下可见药物组细胞贴壁不均匀,缩小呈类圆形,胞核固缩,部分细胞碎裂成片,且随着浓度增加,形态改变更明显;3.DADS能阻滞细胞周期于S期:随药物浓度的增加,G0/G1期、G2/M期细胞比例减少,而S期细胞比例明显增加,提示细胞周期阻滞于S期;4.DADS能促进细胞凋亡:①Hoechst33342染色后荧光显微镜下可见胞核呈凋亡形态学改变,表现为核固缩呈强蓝色荧光致密团块、染色质浓缩边聚向核膜靠拢形成半月形、部分细胞发生核碎裂、凋亡小体形成等;②流式细胞术检测到细胞凋亡率与DADS作用浓度呈正相关;5.免疫细胞化学法与Western Blot法均证实药物组Bcl-2较对照组表达减弱,而Bax表达增强。结论1.DADS能显著抑制HSC-T6体外增殖;2.DADS可明显诱导HSC-T6凋亡,其机制可能与减弱bcl-2、增强bax的蛋白表达相关。3.DADS可能通过抑制HSC-T6增殖与诱导其凋亡,从而起抗纤维化作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2
【目录】：

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