大鼠早期肝纤维化模型的建立及其活化肝星状细胞磁共振显像的实验研究

发布时间：2016-12-15 13:58

  本文关键词：大鼠早期肝纤维化模型的建立及其活化肝星状细胞磁共振显像的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

《苏州大学》 2014年

大鼠早期肝纤维化模型的建立及其活化肝星状细胞磁共振显像的实验研究

张维  

【摘要】：目的：采用SD大鼠皮下注射四氯化碳（CCl4）法，建立大鼠早期肝纤维化模型，为肝纤维化实验研究提供可靠的动物模型；探讨以抗α5β1整合素受体单克隆抗体修饰的超微型超顺磁性氧化铁纳米颗粒（ultrasmall superparamagnetic iron oxide, USPIO）作为特异性分子探针(α5β1-USPIO)，对大鼠早期肝纤维化活化肝星状细胞（hepaticstellate cells, HSCs）进行活体内磁共振靶向分子显像的可行性。 材料和方法：（1）大鼠建模：30只大鼠经腹部皮下注射40%CCl4油溶液作为建模组，剂量为3ml/kg体重，每周2次，持续3周，首次剂量为5ml/kg体重，纯净水作为饮用水。10只大鼠经腹部皮下注射生理盐水作为对照组，剂量及用法同建模组。（2）分子探针构建：将抗α5β1整合素受体单克隆抗体与表面包被有羧基(-COOH)的USPIO通过碳二亚胺法偶联形成α5β1-USPIO特异性分子探针。（3）大鼠分组实验：末次注射CCl4油溶液3天后，从建模组和对照组分别随机抽取12只、4只大鼠进行分组实验研究，其余大鼠处死并取肝脏行病理组织学检查（HE染色、Masson染色及网状纤维染色）及透射电子显微镜检查。12只建模组大鼠随机分为三组（每组4只），分别经股静脉置管注射100μmol铁/kg体重的α5β1-USPIO（α5β1-USPIO建模组）、单纯USPIO（USPIO建模组）和抗α5β1整合素受体单克隆抗体（α5β1建模组）；4只对照组大鼠注射相同剂量的α5β1-USPIO（α5β1-USPIO对照组）。（4）MR检查及分析：大鼠麻醉后，分别于注射前及注射后4h行肝脏MR扫描，计算并比较各组内及各组间注射前与注射后4h大鼠肝脏与肌肉对比噪声比(contrast-to-noise ratio, CNR)。（5）病理组织学检查：MR扫描结束后处死大鼠，取肝脏组织进行病理组织学检查（HE染色、Masson染色、网状纤维染色及普鲁士蓝染色）及透射电子显微镜检查。 结果：（1）建模情况：建模组共有24只大鼠完成实验，死亡6只，死亡率为20%。建模组大鼠均出现营养不良、慢性肝病症状。大鼠肝脏病理组织学检查见肝细胞变性、坏死，胶原及网状纤维增生等改变。根据Ishak肝纤维化评分标准，建模组大鼠均处于早期肝纤维化阶段。对照组10只全部存活，无相应症状且无肝纤维化。（2）大鼠肝脏MR信号变化：注射试剂后4h MR扫描显示，，α5β1-USPIO建模组、α5β1-USPIO对照组及USPIO建模组大鼠肝脏信号强度均呈不同程度降低，且以α5β1-USPIO建模组肝脏信号强度降低最为明显；而α5β1建模组大鼠肝脏信号强度无明显改变。（3）大鼠肝脏与肌肉CNR分析：各组大鼠肝脏与肌肉CNR注射试剂前及注射后4h分别为：α5β1-USPIO建模组：44.63±1.61和255.74±18.3；α5β1-USPIO对照组：45.37±1.87和175.51±12.49；USPIO建模组：44.56±2.08和157.96±13.72；α5β1建模组：44.82±1.39和45.46±8.24。α5β1-USPIO建模组、α5β1-USPIO对照组、USPIO建模各组注射前与注射后4h大鼠肝脏与肌肉CNR比较差异均有明显统计学意义（P均＜0.01），而α5β1建模组注射前与注射后4h大鼠肝脏与肌肉CNR比较差异无统计学意义（t=1.45, P=0.24）。各组大鼠注射试剂后4h肝脏与肌肉对比噪声比（CNR）以α5β1-USPIO建模组最高，α5β1-USPIO对照组、USPIO建模组及α5β1建模组依次减低，差异有统计学意义；各组间进一步两两比较：α5β1-USPIO对照组与USPIO建模组之间比较差异无统计学意义（P=0.094），其余各组间比较差异均有明显统计学意义（P均＜0.01）。（4）大鼠肝脏病理组织学检查：普鲁士蓝染色显示：α5β1-USPIO建模组大鼠肝脏蓝染的铁颗粒主要分布于窦周间隙（Disse间隙）内，与肝星状细胞分布一致；透射电子显微镜（TEM）检查显示：α5β1-USPIO建模组大鼠肝脏星状细胞内可见含铁颗粒的溶酶体，而α5β1-USPIO对照组和USPIO建模组大鼠肝星状细胞内均未见含铁颗粒的溶酶体。 结论：采用皮下注射CCl4油溶液法可以成功建立大鼠早期肝纤维化模型。早期肝纤维化活化的HSCs能特异性吞噬分子探针α5β1-USPIO。应用1.5T MR成像系统和靶向作用于HSCs表面α5β1整合素的特异性分子探针α5β1-USPIO，能够实现活体内早期肝纤维化活化HSCs的磁共振靶向分子显像。

【关键词】：
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.2;R445.2
【目录】：

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