乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白HBSP与TGFβ1诱导蛋白1相互作用促进TGFβ1诱导的肝癌细胞上皮间质转化

发布时间：2018-09-05 18:44

【摘要】：目的探讨乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白(Hepatitis B spliced protein,HBSP)与转化生长因子1诱导蛋白1(transforming growth factor-β1-induced transcript 1,TGFβ1I1)相互作用对TGFβ1诱导的肝癌细胞上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的影响。方法构建HBSP慢病毒表达载体,利用293T细胞包装慢病毒颗粒,感染Huh7肝癌细胞株。以5ng/mLTGFβ1分别诱导稳定表达HBSP的慢病毒细胞株及其对照细胞株,观察细胞形态的变化,并提取细胞蛋白,Westernblot检测上皮间质转化标志物E-钙黏素(E-cadherin,E-cad)、紧密连接蛋白(Claudin-1)、β-链蛋白(β-catenin)、N-钙黏素(N-cadherin,N-cad)的变化。进而以TGFβ1I1特异性siRNA转染上述细胞,Westernblot观察以上指标变化情况。最后以侵袭小室实验和划痕实验分别检测TGFβ1诱导的细胞侵袭与迁移能力的变化。结果筛选获得稳定表达HBSP的慢病毒细胞株Huh7-HBSP-flag-HIV及其对照细胞株Huh7-flag-HIV。以TGFβ1诱导后在显微镜下观察到细胞形态由紧密的上皮形态变为松散的间质形态;特异性抗体检测表明上皮标志物E-cad、Claudin-1、β-catenin表达量下降,而间质标志物N-cad表达上升。侵袭小室实验和划痕实验表明TGFβ1诱导的HBSP表达株侵袭及迁移能力增强。而转染TGFβ1I1特异性siRNA可逆转以上现象。结论 HBSP与TGFβ1I1相互作用可促进TGFβ1诱导的肝癌细胞上皮间质转化并增强其侵袭迁移能力,提示HBSP在HBV相关性肝细胞肝癌发生发展中具有重要的致病意义。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of the interaction of hepatitis B virus splicing specific protein (Hepatitis B spliced protein,HBSP) and transforming growth factor-1 (TGF-1) inducible protein 1 (transforming growth factor- 尾 1-induced transcript 1 (TGF- 尾 1I1) on the epithelial interstitial transformation (epithelialmesenchymal transition,EMT) induced by TGF 尾 1 in hepatocellular carcinoma cells. Methods the expression vector of HBSP lentivirus was constructed. The lentivirus particles were packaged by 293T cells and infected with Huh7 hepatoma cell line. Lentivirus cells expressing HBSP stably and their control cells were induced by 5ng/mLTGF 尾 1, respectively, and the morphological changes of the cells were observed. The changes of E-cadherin E-cadherin (E-cad), tight junction protein (Claudin-1), 尾 -catenin (尾 -catenin) and N-cadherin (N-cadherin N-cad) were detected by Western blot. Then, TGF 尾 1I1 specific siRNA was transfected into the above cells by Western blot to observe the changes of the above indexes. Finally, invasive chamber test and scratch test were used to detect the changes of cell invasion and migration induced by TGF 尾 1, respectively. Results Lentivirus cell line Huh7-HBSP-flag-HIV and control cell line Huh7-flag-HIV. were screened for stable expression of HBSP. After induction with TGF 尾 1, it was observed that the cell morphology changed from dense epithelial morphology to loose interstitial morphology under microscope, and the expression of E-cad-Claudin-1, 尾 -catenin was decreased, while the expression of interstitial marker N-cad was increased. Invasive chamber test and scratch test showed that TGF 尾 1 induced invasion and migration of HBSP expression strain. Transfection of TGF 尾 1I1 specific siRNA could reverse the above phenomenon. Conclusion the interaction between HBSP and TGF 尾 1I1 can promote the epithelial mesenchymal transformation induced by TGF 尾 1 and enhance its invasion and migration, suggesting that HBSP may play an important role in the pathogenesis and development of HBV related hepatocellular carcinoma.
【作者单位】： 福建医科大学基础医学院 消化道恶性肿瘤省部共建教育部重点实验室 福建省肿瘤微生物学重点实验室
【基金】：国家自然科学基金青年基金项目(No.81201293) 福建省卫生厅医学创新课题(No.2012-CX-14) 福建省高校杰出青年科研人才培育计划(No.JA11104) 国家卫生和计划生育委员会共建科学研究基金-福建省卫生教育联合攻关计划(No.WKJ-FJ-29) 福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划(No.JA13129) 福建省卫生系统中青年骨干人才培养项目(No.2014-ZQN-ZD-25)联合资助~~
【分类号】：R512.62;R735.7

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2225134