Ga1-9在实验性结肠炎中的作用机制研究

发布时间：2018-10-12 12:53

【摘要】：研究背景炎症性肠病（Inflammatory bowel disease,IBD）是一种病因尚不明确的慢性非特异性肠道炎症性疾病，包括克罗恩病（Crohn's disease,CD)和溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)。近年来，其发病率在我国明显上升，已成为消化系统的常见疾病[1]。我们前期研究发现细菌产物鞭毛蛋白（CBir1）在炎症性肠病的发生与发展中起重要作用[2]。肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）α及白细胞介素(Interleukin,IL)17是Th1及Th17细胞主要分泌的细胞因子，在多种炎性反应及自身免疫性疾病病理过程中发挥关键作用。Gal-9是半乳糖凝集素（Galectin，Gal）家族的一员，在细胞的粘附聚集、细胞凋亡、嗜酸性粒细胞的趋化与激活、自身免疫性疾病、炎症反应的调控等方面具有重要作用[3]。Gal-9能与T细胞免疫球蛋白3(Tim-3)结合，诱导Th1细胞的凋亡，促使调节性T细胞（Treg）发展[4]，可以阻止Th1与Th17细胞因子释放[5]。由于IBD的主要发病特征包括Th1和（或）Th17细胞因子的过度释放，而Gal-9通过与受体Tim-3结合，，能够激活抗病原体的免疫系统，能够阻止IBD肠道的炎症的反应[6]。因此提示Gal-9可能参与IBD的发病过程。目的通过对IBD模型小鼠进行不同干预，观察IBD动物模型的结肠组织学变化，检测小鼠的血清及结肠组织Gal-9的水平，探讨Gal-9在结肠炎发生发展中的作用。方法将75只SPF级雄性健康BALb/c小鼠随机分为5组：①对照组：自由饮食，不进行干预。②TNBS组：灌肠前禁食24小时，自由饮水。第1、8、15天分别用2.0mg、2.5mg、3.0mgTNBS加50%乙醇溶液100ul灌肠。③TNBS+CBir1组:将10ugCBir1溶于生理盐水100μl于第7、9、12、15天腹腔注射100μl此溶液。④TNBS+TNF-α组：将0.1ugTNF-α溶于生理盐水100μl,腹腔注射100ul，每周2次。⑤TNBS+IL-17组：腹腔注射IL-17500ng，每周2次。对各组小鼠用DAI进行评分，于第22天处死各组小鼠，取外周血ELISA检测Gal-9浓度，取结肠组织HE染色，并给予HI评分，免疫组化法检测结肠组织Gal-9的表达。用SPSS17.0统计软件分析所得数据，定量资料用均数±标准差（x±s）表示，方差齐性用Levene方法检验,多组数据用单因素方差分析（One-wayANOVA），有意义者用LSD-t法两两比较。率的比较采用卡方检验，检验水准α=0.05，P0.05表示差异有统计学意义。结果 (1)结肠粘膜层可见淋巴细胞、浆细胞浸润，局部可见淋巴滤泡反应性增生。TNBS组、TNBS+CBir1组、TNBS+TNF-α组、TNBS+IL-17组与正常组比较，粘膜层可见淋巴细胞、浆细胞逐渐增多，局部淋巴滤泡反应性增生逐渐增多，炎症程度逐渐加重。在正常组小鼠结肠上皮组织中，Gal-9在细胞膜、细胞核有散在表达，细胞膜、细胞浆可见棕色颗粒，TNBS组、TNBS+CBir1组、TNBS+TNF-α组、TNBS+IL-17组与正常组比较,染色强度均减弱，Gal-9的表达均降低。 (2)TNBS组、TNBS+CBir1组、TNBS+TNF-α组与TNBS+IL-17组的DAI评分、HI评分明显高于正常组，而Gal-9在血清中的表达较正常组比较逐渐降低，TNBS+CBir1组、TNBS+TNF-α组、TNBS+IL-17组与TNBS组、TNBS组与正常组比较，差异均有统计学意义（P0.05）；在结肠上皮组织中，Gal-9的表达也逐渐降低，TNBS+CBir1组、TNBS+TNF-α组、TNBS+IL-17组与TNBS组、TNBS组与正常组比较差异均有统计学意义（P0.05）。结论 (1)CBir1能够抑制Gal-9的表达； (2)TNF-α和IL-17能够抑制Gal-9的表达； (3)肠道炎症程度与Gal-9呈负相关；
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R574

【参考文献】