PNPLA3在实验性非酒精性脂肪肝病中的表达及其CpG岛甲基化状态的研究

发布时间：2018-10-15 09:11

【摘要】：研究背景 近年来，非酒精性脂肪肝病（NAFLD）患病率在发展中国家及发达国家都有明显的上升趋势，已成为影响人类健康的第二大肝病。在西方国家，其发病率达20%-40%,在我国普通人群患病率约为15%。NAFLD被认为是代谢综合征在肝脏中的表现，但发病机制未明,目前较为被公认的是“二次打击学说”。随着全基因组学的不断发展，许多国内外研究发现，PNPLA3基因多态性(如rs738409、rs6006460、rs2294918、rs2281135)与其密切相关，有学者发现PNPLA3基因敲除的老鼠肝脏组织并无脂质积聚。Naokikumashiro等人用specific antisenseoligonucleotides(SAO)作用于高脂饮食的大鼠来降低PNPLA3mRNA的表达，发现降低其表达可以减轻防止肝脏脂肪变性，因此推测PNPLA3脂肪合成活性可能占其主导地位。随着对表观遗传学研究不断深入，DNA甲基化在NAFLD中的作用越来越受到人们的重视，尤其是脂质、糖类代谢的关键脂肪因子、限速酶等。目前研究发现PNPLA3rs738409基因多态性与NAFLD密切相关，但在正常肝细胞及脂肪肝细胞中PNPLA3mRNA的表达方面并无相关报道,在脂肪肝细胞中，PNPLA3mRNA是否高表达从而使其脂肪合成活性更加占主导地位而引起脂肪肝？且PNPLA3启动子区甲基化状态是否与非酒精性脂肪性肝病发病有关？ 本研究以体外人肝L02细胞为研究对象，用油酸诱导建立脂肪肝细胞模型，以荧光定量PCR的方法来检测PNPLA3mRNA的表达情况，并用焦磷酸测序的方法对其CpG岛甲基化状态进行分析，探讨PNPLA3在NAFLD中的作用,为NAFLD的防止提供新的理论依据。 目的探讨PNPLA3在非酒精性脂肪肝病中的表达水平及其CpG岛甲基化状态，探讨PNPLA3在NAFLD发生、发展中的作用。 方法：1.采用10ug/ml的油酸作用于人正常肝细胞株L02建立脂肪肝细胞模型，72h后经油红O染色，观察正常组、脂肪肝模型组及给药组细胞内脂滴形成情况，并用荧光定量PCR检测PNPLA3在三组肝细胞中的表达情况。2.采用专用DNA提取试剂盒分别提取正常组、脂肪肝模型组、给药组细胞中DNA，经亚硫酸转化后行PCR扩增目的基因，并用焦磷酸测序方法检测不同组PNPLA3CpG岛中甲基化水平，探讨其在非酒精性脂肪性肝病中的作用。 结果：1、脂肪肝模型组肝细胞PNPLA3mRNA的表达高于正常组，经姜黄素给药后，其表达降低，差异均有统计学意义（p0.05）。2、在PNPLA3启动子区6个检测位点中，，脂肪肝组位点2甲基化水平低于正常组，姜黄素给药后甲基化水平升高，差异均有统计学意义（p0.05），在其余各检测位点中甲基化水平无差异。 结论：1、油红O染色染色后，脂肪肝模型组细胞内发现有大量红色脂滴积聚，而正常组基本上未见脂滴，姜黄素给药组脂滴较模型组减少，表明用10ug/ml的油酸诱导能成功建立体外肝细胞模型。2、PNPLA3mRNA的表达水平及其启动子区甲基化状态与非酒精性脂肪肝发病有关，并起着非常重要的作用。3、抑制PNPLA3d的活性和降低肝脏PNPLA3mRNA的表达今后可能是治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的一个新的治疗方法。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 张文迪;余肖;黄姗;罗小平;;5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因启动子区域甲基化状态与先天性心脏病的关系[J];实用儿科临床杂志;2012年01期

2 梁佳;董稚明;郭艳丽;韩立杰;沈素朋;郭炜;;微RNA-203b基因在食管鳞癌中的表达及其甲基化状态分析[J];肿瘤;2014年09期

3 胡洪玻;胡群;;T系和B系急性淋巴细胞白血病ID4甲基化状态分析[J];中国当代儿科杂志;2010年12期

4 富显果;廖娟;张朵;严爱贞;郭小燕;兰风华;;甲基化特异性熔点曲线分析检测FMR1基因CpG岛甲基化状态方法的建立[J];福建医科大学学报;2012年04期

5 李欢欢;王安娜;王全凯;谭枫;许建宁;;GMA致人支气管上皮细胞恶性转化过程中抑癌基因P15甲基化状态的研究[J];癌变·畸变·突变;2013年01期

6 耿峻峰;孙晋枫;林强;顾峻;赵仰星;王韦;张红宇;何英华;余坚;;hedgehog信号通路的负调控基因在早期非小细胞肺癌中的甲基化状态及其意义[J];中国临床医学;2013年03期

7 梁佳;董稚明;李宏;韩立杰;郭艳丽;沈素朋;郭炜;;MicroRNA-203在人食管鳞癌组织和细胞中的表达及其基因的甲基化状态[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2014年04期

8 董科;李波;覃扬;俞小炯;温尔刚;;5-氮杂胞苷抑制肝癌细胞恶性表型和逆转甲基化状态的作用及机制[J];世界华人消化杂志;2008年17期

9 王炜炜;范蓉;罗彬;郭文文;张庆梅;林永达;肖绍文;谢小薰;;肝癌细胞中OY-TES-1基因启动子的甲基化状态[J];世界华人消化杂志;2011年21期

10 王长春;毛伟敏;凌志强;;多种抑癌基因在食管鳞状细胞癌中的甲基化状态及其临床意义[J];胃肠病学;2012年01期

相关会议论文 前7条

1 许建宁;王全凯;王安娜;胡洁;;GMA致人支气管上皮细胞恶性转化过程中抑癌基因P15甲基化状态的研究[A];第十四届中国科协年会第17分会场：环境危害与健康防护研讨会论文集[C];2012年

2 李遇梅;李政亮;马红;许辉;刘莉萍;赵建华;;两种实时定量PCR方法检测DNA甲基化状态的比较研究[A];中华医学会第十五次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2009年

3 贾绍斌;王义勇;;大鼠总基因甲基化状态改变相关危险因素的研究[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

4 朱小华;徐金华;李锋;项蕾红;;SLE患者CpG基序甲基化状态与LFA-1表达的研究[A];中华医学会第十五次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2009年

5 樊红;仇雪梅;劳英斌;宋蕴薇;;HBxs激活miRNA参与TSGs表达调控[A];第十二次全国医学遗传学学术会议论文汇编[C];2014年

6 张剑英;徐笑红;姜慧芬;王胜;;膀胱癌和肾癌中RASSF1A和BLU的甲基化状态[A];2008年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2008年

7 黄磊;张开立;陈晓燕;孔庆友;孙媛;刘佳;李宏;;大连地区胃癌COX-2的表达特点和甲基化状态的分析[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年

相关博士学位论文 前4条

1 郭尧;启动子区域甲基化状态与炎症细胞TNF-α分泌关系及调控因素的研究[D];华中科技大学;2011年

2 王志刚;基因组不稳定性和印记基因甲基化状态与神经管畸形关系的初步研究[D];北京协和医学院;2009年

3 董科;5-氮杂胞苷抑制肝癌细胞恶性表型和逆转甲基化状态机制的实验研究[D];四川大学;2005年

4 黄磊;COX-2在大连地区胃癌中的低频率表达、甲基化状态及其肿瘤遗传学意义分析[D];大连医科大学;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 丁婷;不育男性精子父系及母系印记基因甲基化状态的初步研究[D];广州医学院;2011年

2 张文迪;MTHFR启动子区域甲基化状态与先天性心脏病的关系[D];华中科技大学;2010年

3 赵

本文编号：2272053