海藻酸钠微球在肠菌移植和肿瘤抗原免疫中的应用

发布时间：2018-10-20 11:48

【摘要】：目的:在前期研究粪便微生物移植(FMT)治疗小鼠溃疡性结肠炎(UC)的基础上,制备海藻酸钠微球,探讨粪便微生物微球移植对UC的治疗作用。同时研究海藻酸钠微球包裹小鼠黑色素瘤细胞B16抗原对小鼠免疫系统的激活作用,期望为临床免疫治疗黑色素瘤提供新的思路。方法:1将BALB/c小鼠分组,采用葡聚糖硫酸钠(DSS)进行UC造模,采用锐孔凝固浴法制得含菌微球,对UC小鼠进行灌胃治疗,另外一组UC模型进行FMT治疗。观察小鼠体重和DAI指数变化;取不同分组的小鼠结肠进行组织学观察,并对其进行16S RNA基因测序分析研究其菌群变化。2建立C57BL/6J小鼠的黑色素瘤模型。研究B16细胞抗原激活DC对黑色素瘤的抑制作用,观察比较小鼠体内肿瘤的生长情况;采用组织病理学方法,观察小鼠脾脏结构的变化。采用微乳法制备包有B16细胞抗原的海藻酸钠微球,给C57BL/6J小鼠免疫之后通过ELISA实验测定血清中IFN-γ、IL-12等细胞因子水平的变化。结果:1、采用锐孔凝固浴法制备的海藻酸钠微球大小在500μm左右,符合小鼠灌胃要求;耐酸性和肠溶性实验表明海藻酸钠微球可以抵抗胃酸的强酸环境,在肠液和结肠液中逐渐崩解,释放粪便微生物;经DSS造模后,小鼠的体重出现明显下降、DAI指数逐渐升高。造模7天后,进行不同的处理,其中粪菌移植组和粪菌微球组,连续治疗7天,小鼠体重自治疗第二天开始上升,DAI指数治疗一天后开始下降,直至降到0左右;没有给予治疗组和用空微球灌胃治疗组,体重均呈逐渐下降趋势,DAI指数逐步上升,第11天(停止DSS后的第三天)死亡或因为严重腹泻而被处死。另外,组织病理学研究结果表明UC模型小鼠结肠组织黏膜表面有溃烂,有多处凸起,隐窝数量减少;经过粪便菌群移植或者采用粪菌微球连续治疗7天后,小鼠的结肠组织粘膜层与正常小鼠的组织结构相似,黏膜层恢复光滑。将小鼠结肠进行16S rRNA基因测序分析发现,DSS处理组与健康组相比,其结肠内螺杆菌、大肠杆菌和拟杆菌的数量显著增多,乳杆菌数量明显下降;经含粪菌微球治疗后螺杆菌、大肠杆菌和拟杆菌的数量显著下降,乳杆菌数量显著回升。2、小鼠黑色素瘤模型结果:接种B16细胞抗原激活的DC小鼠未见肿瘤生长;接种B16细胞1周后再接种B16细胞激活的DC细胞的小鼠,与只接种B16细胞的小鼠比较,肿瘤体积有显著性减小。荷瘤小鼠的脾脏结构有显著变化:C57BL/6J小鼠接种B16细胞14天后,脾脏的滤泡结构增加;而接种B16细胞激活的DC细胞后,小鼠脾脏的滤泡结构显著减少。小鼠接种包含B16细胞抗原后进行血清细胞因子的测定,与对照小鼠比较,发现IFN-γ和IL-12的水平显著增加。结论:采用粪便微生物微球化移植治疗UC有效果,可考虑作为FMT的替代治疗方法;给荷瘤小鼠接种被黑色素瘤抗原激活后的DC细胞,可以抑制肿瘤生长;将黑色素瘤B16细胞抗原微球化后对小鼠进行免疫能够增加IFN-γ和IL-12细胞因子水平,具有潜在的抗肿瘤效果。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R574.62;R739.5

【参考文献】