炎症性肠病MYO9B基因多态性与肠粘膜通透性改变及环孢素A影响的研究

发布时间：2016-12-27 14:50

  本文关键词：炎症性肠病MYO9B基因多态性与肠粘膜通透性改变及环孢素A影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《安徽医科大学》 2013年

炎症性肠病MYO9B基因多态性与肠粘膜通透性改变及环孢素A影响的研究

黄健  

【摘要】：目的探讨MYO9B基因多态性（rs962917、rs1545620）与炎症性肠病(IBD)患者的临床关联。 方法收集临床确诊的196例IBD患者（100例UC，96例CD）外周抗凝血，提取DNA，采用聚合酶链反应(PCR)-连接酶检测反应（LDR）方法测定MYO9B基因多态性，对照组为性别、年龄基本匹配的无消化道症状的健康体检者，同时收集IBD患者的临床资料。采用高效液相色谱仪(HPLC-PED)方法检测118例IBD患者口服乳果糖（L）和甘露醇（M）测试液后尿液中L/M比值。 结果（1）溃疡性结肠炎(UC)患者临床资料分析：100例UC患者男女性别比例为1.5：1，平均年龄为43.64±13.69岁。病变范围以广泛结肠型（53例，53%）为主，直肠/直乙状结肠型32例（32%），左半结肠型15例（15%）；活动程度以中度活动41例（41%）为主，轻度活动23例（23%），重度活动33例（33%），缓解期3例（3%）。（2）克罗恩病(CD)患者临床资料分析：96例CD患者男女性别比例为1.9：1，平均年龄为36.45±9.85岁。病变范围以回肠型（65例，67.7%）为主，结肠型11例（11.5%），回结肠型18例（18.7%），上消化道病变2例（2.1%）。病变行为以狭窄型（48例，50%）为主，炎症型30例（31.2%），穿孔型18例（18.8%）。伴有肛周病变15例（15.6%）。（3）MYO9B基因型分析：UC患者及CD患者MYO9B基因型频率及等位基因频率与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05)；rs962917和rs1545620位点基因多态性与CD发病部位具有一定关联（P＜0.05），rs1545620位点基因多态性与CD患者肛周病变具有一定关联（P＜0.05）；rs962917和rs1545620位点基因多态性与UC疾病活动程度及发病部位无明显相关(P0.05)。(4) MYO9B基因多态性与IBD患者肠粘膜通透性的相关分析：118例IBD患者尿中L/M比值（0.105±0.099）明显高于健康对照者（0.020±0.002，P0.05），IBD患者尿中L/M比值与MYO9B基因多态性无明显相关。 结论MYO9B基因多态性与UC临床特征无明显相关，与CD发病部位有一定相关，，与IBD患者尿中L/M比值无明显相关。 背景肠粘膜屏障（intestinal mucosal barrier）包括机械屏障、免疫屏障、生物屏障、化学屏障等，在预防毒素、细菌等病原微生物过程中发挥重要作用。在炎症性肠病（IBD）发病机制中，肠粘膜屏障功能显著受损，肠粘膜通透性增加，导致肠内细菌及毒素通过受损的肠上皮屏障引起肠粘膜炎症和损伤。修复肠粘膜屏障可控制或减轻炎症和免疫反应，改善肠粘膜通透性，防止并发症，是药物治疗IBD的重要机制。在调控肠粘膜通透性的相关因素中，肌球蛋白轻链激酶（MLCK）对肌球蛋白轻链(MLC)进行磷酸化引起的细胞骨架收缩是肠上皮屏障破坏的必要因素，因此，调控MLCK活性和表达在防治肠粘膜屏障损害过程中具有重要作用。环孢素A(Cyclosporin A，CsA)是一种免疫抑制剂，在IBD临床治疗中具有重要作用。CsA治疗IBD的临床疗效是否和改善肠粘膜通透性有关，目前尚无相关研究。因此，本研究通过观察环孢素A对结肠炎小鼠肠粘膜通透性的影响，同时探讨有关作用机制。 目的用C57BL/6J小鼠建立葡聚糖硫酸钠(dextransulfatesodium，DSS)结肠炎模型，探讨环孢素A对DSS结肠炎小鼠肠粘膜通透性的影响及作用机制。 方法实验分为正常对照组（饮用无菌蒸馏水+腹腔注射0.9%NS）、DSS模型组（DSS溶液+腹腔注射0.9%NS）、环孢素A组（DSS溶液+腹腔注射CsA）。小鼠自由饮用5%DSS溶液1周制备结肠炎模型，环孢素A（25mg/kg）腹腔注射给药，每天一次，共7天。每日行DAI评分，实验结束后取结肠进行HE染色评分，结肠匀浆检测MPO活性、TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平，另取小鼠小肠粘膜进行透射电镜检查和MLCK蛋白表达及活性测定，采用EB和FITC-dextran方法检测小肠粘膜通透性。 结果模型对照组小鼠1周后出现明显体重减轻、便血和腹泻，DAI评分和HI评分增高，同时结肠粘膜MPO活性明显增高。电镜检查小鼠回肠粘膜上皮绒毛萎缩、排列不规则，细胞间连接复合体缩短、变宽，细胞间隙扩大，小肠粘膜通透性增高。小鼠结肠匀浆中TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平均有不同程度增高，小肠粘膜中MLCK活性明显增高，免疫组化和Western blot检测显示小鼠小肠粘膜MLCK表达明显增加。与模型对照组比较，环孢素A组小鼠DAI评分和HI评分明显降低，结肠粘膜MPO活性减低，回肠粘膜上皮细胞绒毛排列整齐，小肠粘膜通透性降低，小肠粘膜MLCK活性和表达及结肠匀浆中TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平均有不同程度降低。 结论环孢素A具有显著的抗结肠炎作用，机制可能与通过调控MLCK表达，改善肠粘膜通透性有关。

【关键词】：
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R574
【目录】：

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