GPR97对炎症性肠病的影响及其机制的研究

发布时间：2018-11-07 13:59

【摘要】：炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一种全球广泛分布的胃肠道炎症性疾病,目前认为IBD的发生是与遗传、环境以及患者自身的免疫系统有关,由于其发病机理较为复杂,目前尚未有根治的方法。加上IBD病人会出现一些并发症,严重影响着患者的身体健康。因此,阐明IBD的发生机制,对找到治疗IBD有效途径具有重要的意义。G蛋白偶联受体(G Protein-Coupled Receptors,GPCRs)是目前发现的家族成员最多的跨膜受体,GPCRs在人体中极为重要,它对多种疾病的发生具有重要的影响,因此,可以作为一些重要疾病的药物靶点。GPR97是粘附性G蛋白偶联受体,它高表达于各种组织、器官以及细胞中。已有研究发现,当小鼠GPR97基因缺失后,能够活化NF-κB信号通路。而NF-κB信号通路的激活与多种炎症因子的表达有关,尤其是在IBD的发生中发挥重要的作用。我们前期的实验结果显示,诱导小鼠实验性IBD,检测发现小鼠肠上皮细胞中GPR97基因发现表达有所下调,说明GPR97对IBD的发生具有一定的相关性。为了进一步研究GPR97基因与IBD发生的关系,我们用DSS诱导野生型(WT)与GPR97基因缺失(GPR97KO)小鼠IBD模型,每天观察小鼠的体重变化、便血以及粪便隐血情况,对小鼠进行临床评分。在诱导第7天,处死小鼠,对小鼠组织以及器官进行相关免疫指标检测以及病理组织切片分析,来判定GPR97对小鼠实验性IBD的影响。结果发现,GPR97基因缺失小鼠表现出更加严重的IBD症状,如脾肿大,结肠变短、变粗,肠粘膜炎症因子浸润等更加明显。小鼠脾细胞、结肠组织以及外周血中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌显著高于野生型小鼠,说明GPR97对小鼠实验性IBD的发生具有保护作用。为了探究GPR97缺失使小鼠IBD加重的原因,我们构建了 WT→WT组和GPR97KO→WT组骨髓嵌合体小鼠后,诱导小鼠IBD模型,同样的检测方法,发现两组小鼠表现出的IBD症状并无显著差异,表明GPR97基因缺失对IBD的影响不是由造血细胞引起的。接着,我们检测了IBD小鼠肠壁通透性,发现GPR97基因缺失并没有引起IBD小鼠的肠壁破坏。结果表明GPR97基因缺失引起的小鼠IBD的加重,并非是通过改变肠上皮细胞的通透性引起的。为了进一步探究其机制,我们分离的WT与GPR97KO小鼠的肠上皮细胞检测其NF-kB信号通络,发现GPR97缺失小鼠的肠上皮细胞中NF-κB P65的磷酸化水平明显上调。因此,我们推测GPR97基因缺失引起的小鼠IBD加重可能是由于其肠上皮细胞NF-κB信号的过度活化,引起肠上皮细胞分泌的炎症因子增多,从而使得炎症反应加重。于是,我们以人的结肠癌细胞株HCT116为靶细胞,采用RNA干扰技术,使得HCT116上GPR97的表达量降低,检测其炎症因子的分泌情况。结果发现,当GPR97基因表达降低后人结肠癌细胞中炎症因子的分泌增加,从而验证了上述的假设。综上所述,GPR97对小鼠炎症性肠病的影响主要是通过影响肠上皮细胞NF-κB信号通路,从而影响炎症因子的分泌所引起的。该研究为以GPR97为靶点进行IBD的临床治疗提供一定的理论和实验基础。
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【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R574

【参考文献】