两种肝组织匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的比较

发布时间：2018-11-21 12:37

【摘要】：背景:前期研究证明正常大鼠肝组织匀浆上清液可诱导人脐带间充质干细胞定向分化为具有部分肝细胞功能的肝样细胞,而肝纤维化大鼠肝组织匀浆上清液的诱导可行性及与前者诱导效果的比较尚不明确。目的:比较正常肝组织及纤维化肝组织微环境诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的能力。方法:采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理盐水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)的方法制备SD大鼠肝纤维化模型,取肝纤维化大鼠及正常大鼠肝脏制备肝组织匀浆上清。将第3代人脐带间充质干细胞进行分组诱导培养:1标准对照组:加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。2纤维化肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及50 g/L纤维化肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。3正常肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及100 g/L正常肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。诱导开始后于倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;取标准对照组及诱导7 d的匀浆组细胞采用Western Blot法检测CK18、AFP、CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2的表达情况,采用ELISA法测定各组细胞培养液中白蛋白水平。结果与结论:与标准对照组长梭形成纤维样细胞相比,诱导7 d时,肝纤维化匀浆组及正常匀浆组细胞形态变化明显,呈类圆形,胞体丰满。与标准对照组相比,两匀浆组细胞均可表达肝细胞标志物CK18和AFP。标准对照组细胞可表达少量CYP2E1,两匀浆组细胞表达CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2等肝细胞功能蛋白,且CYP2E1的表达量较标准对照组明显增加(P0.01),而两匀浆组间上述蛋白的相对表达量差异无显著性意义(P0.05)。同时,两匀浆组细胞分泌白蛋白的能力较标准对照组亦明显增强(P0.01),两匀浆组相比差异无显著性意义(P0.05)。实验结果显示正常肝组织和纤维化肝组织微环境均可诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化,在达到相同诱导效果时,纤维化肝组织所需组织液浓度更低,提示纤维化肝组织微环境可能更有利于人脐带间充质干细胞向肝细胞分化。
[Abstract]:Background: previous studies have demonstrated that the supernatant of normal rat liver tissue homogenate can induce human umbilical cord mesenchymal stem cells to differentiate into hepatoid cells with partial hepatocyte function. However, the feasibility of inducing liver tissue homogenate supernatant and the effect of the former were not clear. Aim: to compare the ability of human umbilical cord mesenchymal stem cells to differentiate into hepatocytes induced by microenvironment in normal and fibrotic liver tissues. Methods: the hepatic fibrosis model of SD rats was established by intraperitoneal injection of 3% thioacetamide saline solution (200 mg/kg,2 / week for 4 weeks). Liver tissue homogenate supernatants were obtained from the liver of rats with hepatic fibrosis and normal rats. The third generation of human umbilical cord mesenchymal stem cells were divided into two groups: (1) Standard control group: DMEM/F12 medium containing 10% fetal bovine serum by volume fraction. 10% fetal bovine serum and 50 g / L fibrotic liver tissue homogenate DMEM/F12 medium. 3 normal liver tissue homogenate group: DMEM/F12 medium containing 10% fetal bovine serum and 100g / L normal liver homogenate was added. The morphological changes of each group were observed under inverted microscope after induction. The expression of CK18,AFP,CYP3A4,CYP2E1,CYP2D6,TPH2 in normal control group and homogenate group for 7 days was detected by Western Blot method and albumin level in culture medium of each group was measured by ELISA method. Results and conclusion: compared with the standard control group, the cells in the liver fibrosis homogenate group and the normal homogenate group changed obviously at 7 days after induction. Compared with the standard control group, both homogenate cells could express CK18 and AFP.. In the standard control group, a small amount of CYP2E1, homogenate cells expressed CYP3A4,CYP2E1,CYP2D6,TPH2 and other hepatocyte functional proteins, and the expression of CYP2E1 was significantly higher than that of the standard control group (P0.01). There was no significant difference in the relative expression of these proteins between the two homogenate groups (P0.05). At the same time, the ability of the two homogenate groups to secrete albumin was also significantly increased compared with the standard control group (P0.01), there was no significant difference between the two homogenate groups (P0.05). The results showed that both normal liver tissue and fibrotic liver tissue microenvironment could induce human umbilical cord mesenchymal stem cells to differentiate into hepatocytes. These results suggest that the microenvironment of fibrotic liver tissue may be more favorable to the differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells into hepatocytes.
【作者单位】：解放军医学院;解放军白求恩国际和平医院药剂科;
【基金】：军队“十二五”重点课题(BWS11J002),课题名称:成体间充质干细胞移植修复战创伤重要器官功能损害的前沿技术研究~~
【分类号】：R575.2

【参考文献】

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【共引文献】

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