自身免疫性肝炎患者肠屏障功能及肝脏巨噬细胞极化分型的研究

发布时间：2018-12-17 11:20

【摘要】：目的:本研究首先比较自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者、AIH肝硬化患者及健康对照者口服乳果糖(lactulose,L)和甘露醇(mannitol,M)双糖分子探针后尿液中二者的回收情况以评价各组肠屏障功能,旨在探索肠屏障功能改变、肠道来源的抗原如脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在AIH发生发展中的作用。另外,我们分析了AIH患者肝组织巨噬细胞极化分型分子的表达,旨在初步探讨并揭示AIH患者肝组织中巨噬细胞的功能表型。方法:第一部分:AIH患者肠屏障功能评价收集2015年1月-2016年1月于天津医科大学总医院消化科就诊的AIH患者5例和对照AIH肝硬化患者5例、健康对照者10例。收集各组受试者口服测试液之后6小时以内的所有尿液,利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定尿液中乳果糖和甘露醇的回收情况,计算尿液乳果糖/甘露醇比值也即L/M值以评价肠屏障功能。本研究经医院伦理委员会审核准许(IRB2015-YX-002),所有患者均知情同意。第二部分:AIH患者肝脏巨噬细胞极化分型评价收集2015年1月-2016年1月于天津医科大学总医院消化科就诊的AIH患者5例和对照肝病患者6例、肝囊肿患者5例,行超声引导下肝穿刺活检术取得长约1.5cm的肝组织条。应用免疫组化法、免疫荧光染色法检测各组肝病患者肝组织中巨噬细胞的活化和极化分型情况。进一步通过RT-PCR法检测并验证肝组织中巨噬细胞的极化分型相关表面标志物和细胞因子。本研究经医院伦理委员会审核准许(IRB2015-YX-002),所有患者均知情同意。结果:第一部分:AIH患者肠屏障功能评价(1)参与尿样收集的5名AIH患者、5名AIH肝硬化患者在口服测试液后耐受良好、过程顺利,无一人出现不良反应。10名健康对照者中1名(10%)出现轻微腹胀等不良反应,2名(20%)出现明显腹胀等中度不良反应,7名(70%)出现腹痛腹泻等重度不良反应,收集结束时3名(30%)健康志愿者未收集到尿液。(2)甘露醇回归方程:y=1.096x+6.510,乳果糖回归方程:y=1.032x+6.362,其中,x为标准品浓度的常用对数,y为标准品峰面积的常用对数。(3)健康对照组尿样中可检测到甘露醇,其回收量、回收率分别为92.35mg(14.60~209.4mg),1.85%(0.29~4.19%),未检测到乳果糖,l/m值为0.00(0.00~0.00);aih患者尿样中乳果糖回收量、乳果糖回收率、l/m值与健康对照组相比,差异均无统计学意义,其甘露醇回收量362.22mg(176.67~515.36mg)、甘露醇回收率7.24%(3.53~10.31%)与健康对照组相比,差异有统计学意义(p=0.023、0.023);aih肝硬化患者尿样中甘露醇回收量414.54mg(276.53~931.18mg)、回收率8.29%(5.53~18.62%)、乳果糖回收量33.40mg(6.80~48.31mg)、回收率0.37%(0.09~0.64%)及l/m值0.05(0.02~0.10)与健康对照组[92.35mg(14.60~209.4mg)、1.85%(0.29~4.19%)、0.00mg(0.00~0.00mg)、0.00%(0.00~0.00%)、0.00(0.00~0.00)]相比,差异均有统计学意义(p=0.021、0.021、0.014、0.014、0.014);aih肝硬化患者尿样中乳果糖回收量33.40mg(6.80~48.31mg)、回收率0.37%(0.09~0.64%)、l/m值0.05(0.02~0.10)与aih患者[0.00mg(0.00~6.33mg)、0.00%(0.00~0.06%)、0.00(0.00~0.03)]相比,差异均有统计学意义(p=0.004、0.004、0.007)。第二部分:aih患者肝脏巨噬细胞极化分型评价(1)aih患者肝组织巨噬细胞数量增多:aih患者与脂肪肝患者、乙肝患者相比,cd68阳性细胞绝对数均显著增多(p=0.034、0.034),脂肪肝患者与乙肝患者相比cd68阳性细胞绝对数间的差异无统计学意义。(2)aih患者肝组织m2型巨噬细胞相对低表达:脂肪肝患者与aih患者、乙肝患者相比,cd206阳性细胞绝对数显著增多(p=0.019、0.046),aih患者与乙肝患者相比cd206阳性细胞绝对数间的差异无统计学意义;脂肪肝患者肝组织cd206相对表达量显著高于aih患者和乙肝患者[(8.08±1.63)比(1.03±0.12)、(2.36±1.32)],差异有统计学意义(p均0.05),而aih患者和乙肝患者肝组织cd206相对表达量差异并没有统计学意义;aih患者肝组织il-10相对表达量显著高于乙肝患者[(2.16±0.89)比(0.93±0.59)],差异有统计学意义(p0.05),而aih患者与脂肪肝患者相比、乙肝患者与脂肪肝患者相比,肝组织il-10的相对表达量差异均无统计学意义。(3)aih患者肝组织m1型巨噬细胞相对高表达:aih患者、乙肝患者肝组织中存在cd68与inos共表达的m1型巨噬细胞,脂肪肝患者和肝囊肿患者肝组织中鲜见cd68与inos共表达的m1型巨噬细胞;aih患者和乙肝患者肝组织tnf-α相对表达量均显著高于脂肪肝患者[(13.29±7.55)、(12.39±3.79)比(0.77±0.38)],差异有统计学意义(P均0.05),而AIH患者和乙肝患者TNF-α相对表达量的差异并无统计学意义;AIH患者和乙肝患者肝组织iNOS相对表达量均显著高于脂肪肝患者[(12.22±5.13)、(10.42±4.27)比(1.25±0.77)],差异有统计学意义(P均0.05),而AIH患者和乙肝患者iNOS相对表达量的差异并无统计学意义;AIH患者和乙肝患者肝组织IL-1β相对表达量显著高于脂肪肝患者[(5.90±3.01)、(12.19±3.71)比(1.76±1.42)],差异有统计学意义(P均0.05),乙肝患者肝组织IL-1β的相对表达量显著高于AIH患者,差异有统计学意义(P0.05)。结论:(1)健康对照者对于相同剂量的乳果糖、甘露醇耐受差,应注重探索一个检测敏感、耐受良好的实验剂量。健康对照组无肠屏障功能的改变,肝硬化患者确有L/M值的增大、肠屏障功能的改变,与前两者相比本研究似倾向于提示AIH患者肠屏障功能尚正常,但未来应在优化方法的基础上扩大样本量进一步验证。(2)AIH患者炎症反应及肝损伤过程中巨噬细胞活化并以M1促炎表型为多。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.1

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