乙醇对H4-ⅡE细胞ADH、ALDH变化及细胞凋亡的影响

发布时间：2019-01-06 12:14

【摘要】：目的：观察不同浓度乙醇对H4-ⅡE细胞增殖抑制、酶的变化、脂质代谢及细胞凋亡的影响,探讨乙醇所致肝损伤的机制。 方法：选用大鼠H4-ⅡE细胞进行体外培养,采用CCK-8法在不同浓度乙醇干预12h、24h、48h后,测定其对H4-ⅡE细胞的增殖抑制作用,分设对照组和实验组,并进行细胞形态学观察；western bolt法检测ADH、ALDH、AMPK、PPAR a、caspase3、caspase8、caspase、TNF-a在各组细胞内的表达；ELISA法检测各组中ADH, ALDH的溢出量；流式细胞术分析细胞凋亡率。 结果： 1.CCK-8法：乙醇对H4-Ⅱ E细胞的生长有抑制作用,且呈一定的剂量依赖性。 2.形态学：乙醇作用于H4-E细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变。 3. western bolt法：①乙醇对大鼠H4-ⅡE细胞ADH、ALDH、AMPK、PPARa表达的影响：与对照组相比,0.05mol/L乙醇处理12h后表达无显著改变(P0.05),余各乙醇组表达减少(P0.05)；②乙醇对大鼠H4-ⅡE细胞caspase3、caspase8、 caspase9、TNF-a表达的影响：与对照组相比,各浓度乙醇组表达增多(P0.05)。 4. ELISA法：①乙醇干预12h、24h：与对照组相比,各浓度乙醇组ADH、ALDH溢出量增多,差异有统计学意义(P0.05),且随着乙醇浓度增加,溢出量增多;②乙醇干预48h：与对照组相比,各浓度乙醇组ADH、ALDH溢出量增多,差异有统计学意义(P0.05);1.6mol/L乙醇组与1.2mol/L乙醇组比较,ADH、ALDH溢出量减少(P0.05)；③乙醇干预72h：与对照组相比,各浓度乙醇组ADH、ALDH溢出量增多,差异有统计学意义(P0.05)；1.2、1.6mol/L乙醇组与1.Omol/L乙醇组比较,ADH溢出量减少(P0.05);1.2mol/L乙醇组与1.6mol/L乙醇组比较,ADH溢出量无显著性差异(P0.05);1.2mol/L乙醇组与1. Omol/L乙醇组比较,ALDH溢出量无显著性差异(P0.05);1.6mol/L乙醇组与1.2mol/L乙醇组比较,ALDH溢出量减少(P0.05)。其余各组间比较均有差别(P0.05),且随着乙醇浓度的增加,ADH及ALDH的溢出量增多(P0.05)。 5.流式细胞术：乙醇组正常活细胞比例较对照组减少(P0.05),早期凋亡、晚期凋亡及死亡细胞细胞比例增多(P0.05)。细胞凋亡率随乙醇浓度的升高呈增·高趋势。 结论：1.乙醇诱导肝细胞凋亡可能与ADH、ALDH代谢途径异常有关。2.ADH、ALDH表达降低可下调肝细胞内AMPK、PPARα表达,致肝细胞损伤。
[Abstract]:Aim: to observe the effects of different concentrations of ethanol on the inhibition of proliferation, changes of enzyme, lipid metabolism and apoptosis of H4- 鈪，

本文编号：2402776