胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜胆汁酸受体GP-BAR1及其mRNA表达的影响

发布时间：2019-08-27 07:31

【摘要】：【研究背景】梗阻性黄疸（以下简称梗黄）是临床实践中常见症状，后期易发生胆系感染，形成败血症，严重者易并发多器官功能衰竭。临床解除胆道梗阻有胆汁内引流术和胆汁外引流术两种方式。研究显示胆汁内引流术使胆汁流入肠道而恢复胆汁肠肝循环，符合生理代谢，患者体力、营养等恢复较好；而胆汁外引流导致胆汁完全丢失，虽然解除梗黄，但后期身体机能恢复较差，消瘦明显。研究还表明胆汁内外引流系有创手术，梗黄患者术前实施胆汁引流可产生并发症，甚至错过最佳手术时间，抵消可能带来的良好预期。因此，临床上梗黄患者采用何种引流术至今未形成共识。目前，大量文献报道胆汁内引流好于胆汁外引流，但具体作用机制不清。我们系列动物实验证实胆汁内引流术具有恢复肝Kuffer细胞免疫功能、改善梗黄形成的内毒血症、纠正分泌紊乱的细胞因子以及对肠道slgA分泌、Occludin蛋白形成和肠黏膜巨噬细胞免疫功能等有作用，而胆汁外引流术上述作用不但不明显，反而出现免疫功能恶化的趋势；研究还显示梗黄除了肝脏功能受损外，肠黏膜功能同样受到损伤，引起肠内细菌和毒素通过屏障入血，形成肠源性感染，促使内源性炎症因子大量分泌，加重病情，胆汁内引流术可以逆转上述病理改变，而胆汁外引流不能，而两种引流方法区1别在于胆汁是否在肠道中复现。近些年文献报道胆汁不但有助于物质的消化吸收，其中的胆汁酸（bile acids，BAs）可作为信号分子，通过受体途径调节机体免疫功能、能量代谢以及抑制肠内细菌过度增殖等，但对于BAs作为信号分子在肠道中的作用研究不清。因此，我们假设：BAs作为信号递质与肠黏膜组织中胆汁酸膜受体GP-BAR1结合，通过其信号通路调节GP-BAR1在肠黏膜组织中表达以及改变肠黏膜屏障功能。【研究目的】观察梗黄形成与解除过程中，大鼠肠黏膜组织形态的改变、肠黏膜组织GP-BAR1受体及其mRNA表达的变化，进一步探讨胆汁内引流术优于胆汁外引流术的分子生物学机制。【材料与方法】采用成年Sprague Dawley雄性大鼠60只，随机分为4组，即假手术组（SH，n=15）、胆汁内引流组（ID，n=15）、胆汁外引流组（ED，n=15）和梗阻性黄疸组（OJ，n=15）。利用既往成熟的实验动物模型：首次手术建立OJ模型和SH模型。术后第8天在OJ模型基础上行第2次手术，建立ID模型和ED模型。SH组、OJ组在首次术后第8天留取标本，ID组和ED组在首次术后第15天留取标本。造模成功后，取末端回肠组织常规HE染色观察肠黏膜组织形态学变化，采用Western blot法检测末端回肠黏膜组织GP-BAR1受体蛋白表达，采用RT-PCR方法检测肠黏膜组织GP-BAR1mRNA的表达水平。【结果】四组大鼠模型成功建立。Western blot方法检测胆汁酸受体GP-BAR1在大鼠回肠黏膜组织中有表达。OJ组大鼠肠黏膜组织胆汁酸受体GP-BAR1表达明显高于SH组（0.641±0.087vs0.398±0.062，P＜0.01）；行胆汁外引流后（ED组）肠黏膜组织的GP-BAR1受体表达稍有下降（ED vs OJ，0.597±0.093vs0.641±0.087，P＞0.05），但尚未降到SH组水平（ED vs SH，0.597±0.093vs0.398±0.062，P＜0.01）；然而，胆汁内引流后（ID组）肠黏膜组织GP-BAR1受体表达明显下调（ID vs OJ，0.447±0.057vs0.641±0.087，P＜0.01；ID vs ED，0.447±0.057vs0.597±0.093，P＜0.01），接近于SH组表达水平（ID vs SH，0.447±0.057vs0.398±0.062，P＞0.05）。OJ组肠黏膜组织GP-BAR1mRNA明显高于SH组（OJ vs SH，0.796±0.114vs0.407±0.072，P＜0.01）；行外引流后(ED组）表达稍有减弱（ED vs OJ，0.729±0.134vs0.796±0.114，P＞0.05）但尚未降到假手术组水平（ED vs SH，0.729±0.134vs0.407±0.072，P＜0.01）；行内引流后（ID组）GP-BAR1mRNA表达明显下调（ID vs OJ，0.483±0.107vs0.796±0.114，P＜0.01；ID vs ED，0.483±0.107vs0.729±0.134，P＜0.01），与假手术组（SH组）比较无明显差异（ID vs SH，0.483±0.107vs0.407±0.072，，P＞0.05）。【结论】梗阻性黄疸大鼠肠黏膜组织中GP-BAR1及其mRNA表达水平明显增强，胆汁内引流术可以逆转这种改变，但外引流却不能，提示胆汁内引流优于外引流的机制可能与肠黏膜组织GP-BAR1及其mRNA的表达调控有关。
【图文】：

HE染色,蛋白,肠黏膜,肠道

SH 组（HE×100）SH 组（HE×200）图 1 四组大鼠回肠 HE 染色结果3 肠黏膜组织 GP-BAR1 受体表达结果GP-BAR1 是一种细胞膜受体蛋白，研究证明在肠道中也有表达，胆汁酸是其天然配体。用干净的载玻片将肠道黏膜刮取，采用 Western blot 检测不同组别的肠黏膜 GP-BAR1 蛋白表达量。实验结果采用 Gel-Pro 图像分析系统分别测定回肠末端 GP-BAR1 蛋白和内参β-actin 蛋白 IOD 值，得出比值 R 进行统计分析。分析结果显示：OJ 组 GP-BAR1 蛋白表达的最多（0.641±0.087），行外引流后其稍有下降（0.597±0.093）（ED vsOJ，P＞0.05），行内引流术后GP-BAR1 蛋白明显下降（0.447±0.057）（ID vs OJ，P < 0.01），假手术组其表达量最低（0.398±0.062）（SHvsOJ，P<0.01）。

肠黏膜,蛋白表达

【共引文献】