过表达MORC2通过下调p53含量抑制L02肝细胞脂肪变性

发布时间：2019-10-02 01:31

【摘要】：目的研究过表达MORC2对人L02肝细胞脂肪变性程度的影响及可能机制。方法利用慢病毒转染技术在L02肝细胞中过表达MORC2,qRT-PCR及Western blot鉴定过表达效果后,对L02肝细胞进行脂肪变性诱导,测定细胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量并比较过表达前后L02肝细胞的脂肪蓄积程度;利用芯片技术对过表达MORC2前后的基因表达谱进行检测与Pathway分析,筛选过表达MORC2时发生变化的通路并选择对脂代谢有调控作用的p53进行研究;Western blot检测在L02肝细胞脂肪变性诱导时过表达MORC2对p53蛋白含量的影响;在过表达MORC2的基础上对L02肝细胞过表达p53,qRT-PCR及Western blot鉴定p53过表达效果后,通过TG测定观察过表达p53对过表达MORC2改变的L02肝细胞脂肪蓄积程度产生的影响。结果 qRT-PCR及Western blot证明过表达MORC2成功;过表达MORC2的L02肝细胞在脂肪变性诱导后TG含量较MORC2正常表达的L02肝细胞明显降低(P0.01);基因表达谱芯片及Pathway分析显示脂代谢调控相关的p53通路在过表达MORC2后发生变化;Western blot显示过表达MORC2后,L02肝细胞中p53蛋白水平在脂肪变性诱导前后均降低;qRT-PCR及Western blot验证p53过表达成功,且过表达p53可部分解除MORC2对L02肝细胞脂肪变性的缓解作用。结论过表达MORC2可通过下调p53从而缓解肝细胞脂肪变性。
【图文】：

2．3基因表达谱芯片结果中MOＲC2可能影响的通路ＲocheNimbleGen12×135K人类基因表达谱芯片涵盖了45033个来自包括NCBI在内的权威数据库的基因。与L02-ctrl组细胞相比，L02-MOＲC2组中发生变化的、表达差异大于2倍的基因共1736个。从根据它们进行通路聚类后的Pathway分析结果来看，MOＲC2可能影响的通路包括Hippo、p53、TGF-β、MAPK及一些肿瘤相关通路(图3)。图3基因表达谱芯片结果中MOＲC2可能影响的通路2．4过表达MOＲC2对L02肝细胞中p53蛋白水平的影响Westernblot检测结果显示，，未经脂肪变性诱导时，L02-MOＲC2未诱导组细胞中的p53蛋白含量低于L02-ctrl未诱导组［L02-MOＲC2未诱导组(112．65±3.06)、L02-ctrl未诱导组(134．19±4．43)，P＜0.01］;而在脂肪变性诱导后，p53蛋白含量均比未诱导时明显上升，且L02-MOＲC2诱导组p53蛋白含量仍低于L02-ctrl诱导组［L02-MOＲC2诱导组(194．33±1.80)、L02-ctrl诱导组(234．69±2．64)，P＜0.01，图4］。MOＲC2可下调L02肝细胞中p53的蛋白水平，进一步提示MOＲC2减轻肝细胞脂肪变性的作用可能与降低p53表达有关，故我们拟通过上调p53表达，观察是否能减弱MOＲC2的这种作用。1:L02-MOＲC2未诱导组，2:L02-ctrl未诱导组，3:L02-MOＲC2诱导组，4:L02-ctrl诱导组图4过表达MOＲC2对L02肝细胞中p53蛋白水平的影响2．5L02肝细胞过表达p53的效果鉴定qＲT-PCＲ检测结果显示，在转染对照质粒pCMV-XL5-ctrl时，p53的mＲNA的相对表达量在L02-WT组、L02-ctrl组及L02-MOＲC2组中无明显差别［L02-WT组(1．00±0．15)、L02-ctrl组(1．17±0．24)、L02-MOＲC2组(1．04±0．22)，P＞0.05］;在转染p53过表达质粒pCMV-XL5-p53时，各组MOＲC2在转录水平均较转染对照质粒时明显上升［L02-WT组(1．00

APK及一些肿瘤相关通路(图3)。图3基因表达谱芯片结果中MOＲC2可能影响的通路2．4过表达MOＲC2对L02肝细胞中p53蛋白水平的影响Westernblot检测结果显示，未经脂肪变性诱导时，L02-MOＲC2未诱导组细胞中的p53蛋白含量低于L02-ctrl未诱导组［L02-MOＲC2未诱导组(112．65±3.06)、L02-ctrl未诱导组(134．19±4．43)，P＜0.01］;而在脂肪变性诱导后，p53蛋白含量均比未诱导时明显上升，且L02-MOＲC2诱导组p53蛋白含量仍低于L02-ctrl诱导组［L02-MOＲC2诱导组(194．33±1.80)、L02-ctrl诱导组(234．69±2．64)，P＜0.01，图4］。MOＲC2可下调L02肝细胞中p53的蛋白水平，进一步提示MOＲC2减轻肝细胞脂肪变性的作用可能与降低p53表达有关，故我们拟通过上调p53表达，观察是否能减弱MOＲC2的这种作用。1:L02-MOＲC2未诱导组，2:L02-ctrl未诱导组，3:L02-MOＲC2诱导组，4:L02-ctrl诱导组图4过表达MOＲC2对L02肝细胞中p53蛋白水平的影响2．5L02肝细胞过表达p53的效果鉴定qＲT-PCＲ检测结果显示，在转染对照质粒pCMV-XL5-ctrl时，p53的mＲNA的相对表达量在L02-WT组、L02-ctrl组及L02-MOＲC2组中无明显差别［L02-WT组(1．00±0．15)、L02-ctrl组(1．17±0．24)、L02-MOＲC2组(1．04±0．22)，P＞0.05］;在转染p53过表达质粒pCMV-XL5-p53时，各组MOＲC2在转录水平均较转染对照质粒时明显上升［L02-WT组(1．00±0．15)、(5．57±0．42)，L02-ctrl组(1．07±0．24)、(5．47±0.53)，L02-MOＲC2组(0．96±0．22)、(5．19±0．39)，P＜0.01］。但各组间无明显差别［L02-WT组(5．57±0．42)、L02-ctrl组(5．47±0．53)、L02-MOＲC2组(5．19±0.39)，P＞0.05］。Westernblot检测结果显示，可见转染对照质粒pCMV-XL5-ctrl的3组细胞中，L02-MOＲ
【作者单位】： 第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科;
【基金】：国家自然科学基金(81170382)~~
【分类号】：R575

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2544677